雌激素受體β在大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨與成脂肪分化平衡中的作用.pdf

1、骨的生理性改建是口腔正畸牙齒移動(dòng)的基礎(chǔ)，因而骨的生長(zhǎng)與代謝直接或間接地影響正畸的療效?？谇徽^(guò)程中牙齒在骨組織中的移動(dòng)主要是通過(guò)骨的形成和吸收來(lái)完成的。雌激素作為調(diào)控骨改建的重要條件之一是通過(guò)雌激素受體完成的，然而雌激素受體β是否參與介導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖與分化，至今仍有待于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)論證。
　　本研究采用siRNA技特異性術(shù)對(duì)雌激素受體β進(jìn)行干涉，并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入分離培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞中，觀察其在成骨和成脂肪分化平衡的作用

2、。
　　研究?jī)?nèi)容如下：
　　1．SiRNAERβ特異性表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
　　根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則，以ERβ基因的RNA序列為靶序列，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了三對(duì)特異性siRNA干擾序列，經(jīng)DNA測(cè)序，結(jié)果顯示所插入序列與合成序列完全相同，證明載體構(gòu)建正確。
　　2．不同年齡骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨與成脂分化平衡的研究
　　采用全骨髓自然貼壁篩選法從不同年齡的雌性SD大鼠股骨中分離、純化培養(yǎng)出BMSCs，并通過(guò)倒置顯微

3、鏡觀察、MTT細(xì)胞生長(zhǎng)曲線等生物學(xué)行為觀察，初步判斷其活力和均一性。再經(jīng)成骨、成脂等多向分化誘導(dǎo)，獲得了茜素紅染色的類成骨細(xì)胞和油紅-O染色的類脂肪細(xì)胞。采用圖像分析軟件進(jìn)行分析，計(jì)算出礦化率和成脂率。
　　結(jié)果表明隨著年齡的增加成骨能力減弱而成脂肪能力增強(qiáng)。骨髓中的脂肪細(xì)胞增多可能是促成增齡性疾病－骨質(zhì)疏松的原因。
　　3．雌激素受體β與大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成脂肪分化相關(guān)性研究
　　通過(guò)對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成脂肪分化過(guò)

4、程中雌激素受體β表達(dá)規(guī)律的研究，進(jìn)一步明確雌激素受體β與骨代謝的的相關(guān)性。大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)，成骨誘導(dǎo)分化，鈣染色。成脂肪誘導(dǎo)分化，油紅O染色。Westernblot方法測(cè)定大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成脂肪分化過(guò)程中雌激素受體β的表達(dá)。全骨髓貼壁的方法培養(yǎng)獲得大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。成脂誘導(dǎo)分化顯微鏡下脂肪滴、油紅O染色陽(yáng)性細(xì)胞隨成脂肪時(shí)間增加而增多。雌激素受體β的表達(dá)隨成脂時(shí)間的增加而遞增。大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成脂肪分化過(guò)程中ERβ的表達(dá)隨時(shí)間

5、逐漸增加。
　　4.ER-β特異性siRNA對(duì)rBMSC成骨與成脂肪分化影響的研究
　　轉(zhuǎn)染siRNAER-β骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在雌激素條件下進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化，應(yīng)用試劑盒檢測(cè)堿性磷酸酶活性和茜素紅方法染色鈣化結(jié)節(jié)，而成脂肪誘導(dǎo)分化后也應(yīng)用Pt－PCR技術(shù)檢測(cè)脂蛋白脂肪酶含量和油紅－O方法染色脂肪顆粒。結(jié)果顯示雌激素受體β干涉后的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨后堿性磷酸酶活性增強(qiáng)鈣化結(jié)節(jié)也見(jiàn)增多，而誘導(dǎo)成脂肪后LPLmRNA表達(dá)量顯著降低