阿司匹林對體外培養(yǎng)骨髓基質干細胞成骨性分化的影響.pdf

1、骨質疏松癥(osteoporosis，OP)是以骨量減少、骨的微結構退化為特征的，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。骨質疏松癥是年齡相關性疾病，人口老齡化程度越高，患病人數(shù)越多，骨質疏松癥將嚴重危害中老年人群健康和生活質量。我國是人口大國，也是老年人口絕對數(shù)量最多的國家之一，人口老齡化呈逐步加快之勢，骨質疏松發(fā)病率逐年增高。雖然目前抗骨質疏松藥物種類有很多，但都存在一些問題，如副作用較大，療效不顯著、費用高等。近年來

2、，根據流行病學調查及有關報道發(fā)現(xiàn)，長期服用小劑量阿司匹林一年以上，能夠明顯提高老年人骨密度，預示阿司匹林具有潛在的抗骨質疏松的效果。阿司匹林不但副作用少、廉價，而且治療疾病的范圍廣泛，是中老年人的常用藥。因此研究阿司匹林對骨質疏松的預防與治療的確切療效具有重要意義，可能為阿司匹林運用于臨床抗骨質疏松的治療提供理論依據。
　　目的：
　　探討阿司匹林對骨髓基質干細胞（BMSCs）成骨性分化的影響，為進一步將阿司匹林應用于臨床骨

3、質疏松治療奠定基礎。
　　方法：
　　無菌條件下分離4周齡SD大鼠股骨和脛骨，提取骨髓并制成單細胞懸液，采用全骨髓貼壁法和細胞密度梯度分離法相結合的方式培養(yǎng)骨髓基質干細胞，獲得特性穩(wěn)定的3-6代BMSCs應用于本實驗研究。通過成骨誘導培養(yǎng)基誘導BMSCs成骨性分化，并在誘導培養(yǎng)基中加入不同濃度阿司匹林（0.5、1、2、5、10mmol/L），分為低、中、高濃度組，同時設立對照組。觀察培養(yǎng)細胞形態(tài)學變化，采用CCK-8法分析細

4、胞增殖情況，繪制細胞生長曲線。使用ELISA等檢測方法比較阿司匹林組與對照組細胞堿性磷酸酶（ALP）活性以及骨鈣素（OC）分泌量的差異。應用鈣結節(jié)染色、堿性磷酸酶染色觀察比較成骨效果，并通過半定量分析比較各組之間的差異。
　　結果：
　　通過全骨髓貼壁法和細胞密度梯度分離法相結合的方式，得到純度較高、特性穩(wěn)定的骨髓基質干細胞，可以應用于實驗研究。原代細胞多呈現(xiàn)為類圓形、短梭形、多角形或不規(guī)則形，可見細胞集落，大小不一。傳代細

5、胞體積較大，增殖速度快，細胞呈漩渦狀生長，多為梭形、三角形或多角形，細胞核橢圓形或圓形。從細胞生長曲線上分析，阿司匹林無明顯促進細胞增殖活性的作用，而且高濃度阿司匹林（＞5mmol/L）能夠強烈抑制細胞增殖。中低濃度組濃度阿司匹林（0.5、1、2mmol/L）可促進BMSCs的成骨性分化，堿性磷酸酶含量、骨鈣素分泌量在不同階段顯著高于對照組；14天茜素紅染色可見中低濃度組鈣結節(jié)數(shù)量高于對照組；堿性磷酸酶染色顯示中低濃度組陽性細胞數(shù)量明顯