體外共培養(yǎng)人牙髓干細胞對人牙囊干細胞增殖及成骨分化的影響.pdf

1、目的：牙囊是牙齒發(fā)育早期包繞牙胚表面的疏松結締組織，牙囊與牙周相關組織的形成有密切關系。牙囊細胞存在于牙囊組織中，其已被證明在適當?shù)臈l件下具有向成牙骨質或成骨方向分化的潛力。但時下我們對于牙囊細胞成骨分化具體的機制仍不十分清楚。牙髓中的主要細胞是成牙本質細胞，成牙本質細胞在牙齒發(fā)育早期與牙囊細胞存在交互信號傳導，彼此間有可能存在相互影響。因此本研究的目的是在體外條件下探索人牙髓干細胞（ HDPSCs）對人牙囊干細胞（HDFSCs）增殖及

2、成骨分化作用的影響。
　　方法：⑴利用改良的組織塊-消化聯(lián)合法對HDFSCs和 HDPSCs進行分離、培養(yǎng)，并采用細胞免疫組化方法、流式細胞術以及多向誘導方法對兩種細胞進行鑒定。⑵體外共培養(yǎng)模型的構建：采用0.4μm孔徑的Transwell小室構建HDFSCs和HDPSCs體外共培養(yǎng)體系。⑶HDFSCs增殖活性變化的檢測：采用24孔板規(guī)格的Transwell小室構建共培養(yǎng)體系，應用CCK-8檢測法對HDFSCs增殖活性進行檢測。⑷

3、HDFSCs成骨相關基因表達的檢測：采用6孔板規(guī)格的Transwell小室構建共培養(yǎng)體系，共培養(yǎng)一周后，采用qRT-PCR對HDFSCs成骨相關基因ALP、Runx2、OPN、BSP及Col-1進行定量檢測,并運用2－△△Ct法進行結果分析。
　　結果：①成功分離、培養(yǎng)、鑒定 HDFSCs和HDPSCs。②HDFSCs增殖活性檢測結果：與對照組相比，與 HDPSCs共培養(yǎng)后前3天，HDFSCs增值活性未見明顯變化，從第4天開始，共