體外共培養(yǎng)人牙髓干細(xì)胞對(duì)人牙囊干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響.pdf

1、目的：牙囊是牙齒發(fā)育早期包繞牙胚表面的疏松結(jié)締組織，牙囊與牙周相關(guān)組織的形成有密切關(guān)系。牙囊細(xì)胞存在于牙囊組織中，其已被證明在適當(dāng)?shù)臈l件下具有向成牙骨質(zhì)或成骨方向分化的潛力。但時(shí)下我們對(duì)于牙囊細(xì)胞成骨分化具體的機(jī)制仍不十分清楚。牙髓中的主要細(xì)胞是成牙本質(zhì)細(xì)胞，成牙本質(zhì)細(xì)胞在牙齒發(fā)育早期與牙囊細(xì)胞存在交互信號(hào)傳導(dǎo)，彼此間有可能存在相互影響。因此本研究的目的是在體外條件下探索人牙髓干細(xì)胞（ HDPSCs）對(duì)人牙囊干細(xì)胞（HDFSCs）增殖及

2、成骨分化作用的影響。
　　方法：⑴利用改良的組織塊-消化聯(lián)合法對(duì)HDFSCs和 HDPSCs進(jìn)行分離、培養(yǎng)，并采用細(xì)胞免疫組化方法、流式細(xì)胞術(shù)以及多向誘導(dǎo)方法對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行鑒定。⑵體外共培養(yǎng)模型的構(gòu)建：采用0.4μm孔徑的Transwell小室構(gòu)建HDFSCs和HDPSCs體外共培養(yǎng)體系。⑶HDFSCs增殖活性變化的檢測(cè)：采用24孔板規(guī)格的Transwell小室構(gòu)建共培養(yǎng)體系，應(yīng)用CCK-8檢測(cè)法對(duì)HDFSCs增殖活性進(jìn)行檢測(cè)。⑷

3、HDFSCs成骨相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)：采用6孔板規(guī)格的Transwell小室構(gòu)建共培養(yǎng)體系，共培養(yǎng)一周后，采用qRT-PCR對(duì)HDFSCs成骨相關(guān)基因ALP、Runx2、OPN、BSP及Col-1進(jìn)行定量檢測(cè),并運(yùn)用2－△△Ct法進(jìn)行結(jié)果分析。
　　結(jié)果：①成功分離、培養(yǎng)、鑒定 HDFSCs和HDPSCs。②HDFSCs增殖活性檢測(cè)結(jié)果：與對(duì)照組相比，與 HDPSCs共培養(yǎng)后前3天，HDFSCs增值活性未見(jiàn)明顯變化，從第4天開(kāi)始，共