淫羊藿苷促進大鼠骨髓基質(zhì)干細胞成骨性分化的作用與機理研究.pdf

1、淫羊藿苷是傳統(tǒng)的治療骨質(zhì)疏松癥中草藥淫羊藿中的一種主要黃酮類物質(zhì)，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，淫羊藿苷具有抗骨質(zhì)疏松、促進骨形成的生物活性，是淫羊藿中重要的一種有效活性成分，但對其作用機制的研究較少。 本實驗研究了淫羊藿苷對原代培養(yǎng)的大鼠骨髓基質(zhì)干細胞成骨性分化的影響，并在細胞及分子水平上探討了其作用的可能機理。取三月齡 SD 大鼠骨髓，分離骨髓基質(zhì)干細胞(rBMSCs)進行原代培養(yǎng)，在第一次換液后分組并加入10μmol/L，1μmol

2、/L 和0.1μmol/L 的淫羊藿苷。從培養(yǎng)第9天起，用10<'-8>mol/l地塞米松(Dex)、10mmol/lβ-磷酸甘油(β-GP)和100mmol/L 抗壞血酸磷酸(AsAp)誘導(dǎo)rBMSCs向成骨細胞方向分化。采用MTT法及流式細胞術(shù)分析淫羊藿苷對大鼠骨髓基質(zhì)干細胞增殖的影響；采用偶氮偶合法進行堿性磷酸酶陽性克隆(CFU-F<,ALP>)組織化學(xué)染色；采用對硝基酚磷酸鹽法測定細胞裂解液中 ALP 活性；采用免疫放射法測定培

3、養(yǎng)液中骨鈣素 (OC) 水平；von Kossa染色測定鈣化結(jié)節(jié)數(shù)目；采用RT-PCR法及實時定量PCR法檢測了淫羊藿苷對rBMSCs中與成骨相關(guān)的7種基因表達的影響。 結(jié)果顯示，淫羊藿苷對rBMSCs的影響呈劑量依賴性，其中以濃度為10 μmol/L 時作用最強，10 μmol/L 淫羊藿苷抑制rBMSCs的增殖，但在培養(yǎng)的各時期均顯著促進其成骨性分化，表現(xiàn)在：(1)淫羊藿苷在rBMSCs誘導(dǎo)培養(yǎng)的早期提高細胞的ALP活性、增

4、加CFU-F<,ALP>數(shù)；(2)在rBMSCs誘導(dǎo)培養(yǎng)的晚期增加細胞CFU-F<,Ca>數(shù)、促進骨鈣素分泌量和細胞外基質(zhì)中鈣鹽沉積量；(3)淫羊藿苷在rBMSCs誘導(dǎo)培養(yǎng)的第8和12天均顯著提高了ALP、OC、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β<,1>)、骨形成蛋白-2(BMP-2)、胰島樣生長因子-1(IGF-I)、骨橋蛋白(OP)和骨涎蛋白(BSP)等成骨相關(guān)基因mRNA的表達水平。 實驗結(jié)果表明，淫羊藿苷是中草藥淫羊藿抗骨質(zhì)