激素誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨成脂方向分化中DKK-1基因的表達(dá).pdf

1、目的： 通過實(shí)驗(yàn)檢測糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞向成脂成骨方向轉(zhuǎn)化的作用，通過體外培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的方法來研究成脂成骨細(xì)胞中DKK-1的表達(dá)，為今后的實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： Percoll法分離大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞，通過頻繁更換培養(yǎng)液及反復(fù)傳代的方法純化細(xì)胞。用傳至2代細(xì)胞作MTT實(shí)驗(yàn)，確定成脂成骨細(xì)胞誘導(dǎo)液的濃度以減少對細(xì)胞的毒性作用。傳3代MSC接種于6孔培養(yǎng)板上，共接種26板，分為成脂1、成脂2、成骨1、成骨

2、2及對照組，其中在成脂成骨誘導(dǎo)組(2周)中加入蓋玻片以做油紅O、鈣結(jié)節(jié)染色及ALP測定，分別在成脂成骨誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞6小時(shí)、24小時(shí)、1周、2周后，用RT-PCR法測定細(xì)胞中DKK1基因片段含量。 結(jié)果： 傳3代大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞成脂成骨誘導(dǎo)2周后，通過油紅O、鈣結(jié)節(jié)染色及ALP測定，證明成脂成骨誘導(dǎo)成功，但分別在成脂成骨誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞6小時(shí)、24小時(shí)、1周、2周后，沒有檢測出DKK-1基因片段。 結(jié)論