17-β雌二醇通過雌激素受體α抑制肺動脈平滑肌細胞的增殖.pdf

1、目的：觀察17-β雌二醇（E2）對低氧誘導的人肺動脈平滑肌細胞增殖（hPASMCs）的影響，并探討雌激素受體(estrogen receptor,ER)在其中的介導作用。
　　方法：
　　1.細胞培養(yǎng)：常氧組hPASMCs置于37℃、5％CO2、95%氧氣的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，低氧組hPASMCs置于37℃、5%CO2、92%N2的三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2d換液1次，并以0.25%胰蛋白酶進行消化傳代，實驗所用細胞為第5~8代，

2、均處于對數(shù)生長期。實驗前，細胞均在不含F(xiàn)BS的無酚紅DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h進行同步化。
　　2.細胞干預：應用第5~8代hPASMCs，分為常氧組、低氧組、低氧+E2(10-6mol/L)組、低氧+E2(10-7mol/L)組、低氧+E2(10-8mol/L)組、低氧+E2(10-9mol/L)組，行MTT實驗測定不同干預條件下細胞增殖情況，篩選最適E2干預濃度。其次，將細胞分為常氧組、低氧組、低氧+E2(10-6mol/L)

3、、低氧+E2(10-6mol/L)+MPP組、低氧+E2(10-6mol/L)+PHTPP組，行MTT實驗測定各組細胞增殖情況，并采用RT-PCR法測定不同組hPASMCs中ERα、ERβ及PCNA的mRNA表達水平，采用Western blot法測定不同組hPASMCs中ERα、ERβ及PCNA的蛋白表達水平。
　　結果：
　　慢性低氧可顯著刺激hPASMCs增殖（P<0.01），應用E2干預后hPASMCs增殖減少（P<

4、0.01），且最佳抑制濃度為10-6mol/l。另外，慢性低氧誘導細胞增殖的同時伴隨ERαmRNA及蛋白表達下降（P<0.01）， PCNAmRNA及蛋白表達升高（P<0.01），而ERβmRNA及蛋白表達無明顯變化（P＞0.05）；應用E2干預后，抑制了細胞的增殖并逆轉了ERα、PCNA指標的以上變化（P<0.01），但對ERβ表達無明顯影響（P＞0.05）。在低氧+E2基礎上，應用MPP后可顯著削弱E2的以上作用（P<0.01），而