AMPK抑制冠狀動脈平滑肌細胞增殖的機理研究.pdf

1、[目的]血管平滑肌細胞的增殖在動脈粥樣硬化以及血管成形術(shù)后再狹窄的發(fā)生和發(fā)展過程中起了至關(guān)重要的作用。有大量的研究證實，體外培養(yǎng)的豬冠狀動脈血管平滑肌細胞是一個適合用于研究冠狀動脈血管疾病及其相關(guān)機制的模型。磷酸腺苷激活的蛋白激酶(Adenosine monophosplate-activated protein Kinase，AMPK)是一種重要的蛋白激酶，能感受到細胞內(nèi)AMP的濃度以及AMP/ATP比值上的變化，在真核生物細胞中，是

2、細胞應對低能量狀態(tài)的主要調(diào)節(jié)器。我們以原代分離培養(yǎng)的豬冠狀動脈血管平滑肌細胞(Porcine coronary arterysmooth muscle cells，PCASMCs)和豬冠狀動脈組織為模型，并輔以小鼠頸總動脈結(jié)扎模型，探討AMPK的激活是否影響血管平滑肌細胞尤其是冠狀動脈平滑肌細胞的功能和增殖，以期為AMPK作為抑制冠狀動脈增殖性疾病的靶點提供有效數(shù)據(jù)。
　　 [方法]AICAR(5-Aminoimidazole-

3、4-carboxamide-l-J3-D-ribofuranoside)是AMPK的激活劑，用其處理體外分離培養(yǎng)的豬冠狀動脈血管平滑肌細胞，通過WST-1和細胞計數(shù)檢測平滑肌細胞的增殖。之后，通過western blot檢測AMPK的磷酸化水平及p44/42 MAPK的磷酸化水平。以及其下游的p27、PCNA等的表達。通過檢測凋亡相關(guān)蛋白easpase-3的表達，檢測AICAR處理的豬冠狀動脈血管平滑肌細胞是否出現(xiàn)凋亡。與此同時，通過m

4、yography血管功能實驗檢測AICAR對豬冠狀動脈收縮、舒張功能的影響，以及AICAR對小鼠頸總動脈結(jié)扎后結(jié)扎位點新生內(nèi)膜形成的影響。
　　 [結(jié)果]AICAR激活的AMPK處理后能夠明顯的抑制血清誘導的豬冠狀動脈血管平滑肌細胞的增殖，并且這種抑制作用是劑量依賴的。AICAR處理的豬冠狀動脈血管平滑肌細胞，其AMPK磷酸化水平明顯升高，且p44/42 MAPK磷酸化水平受到明顯的抑制，但AMPK通路相關(guān)的p27、PCNA等蛋

5、白表達量沒有明顯的差異，且凋亡相關(guān)蛋白caspase-3也并未檢測到發(fā)生剪切，說明AICAR不會導致豬冠狀動脈血管平滑肌細胞的凋亡。且其可能是通過抑制p44/42 MAPK的磷酸化來抑制細胞增殖的。myography血管功能實驗顯示AICAR抑制Ach誘導的豬冠狀動脈血管收縮；并且AICAR能引起Ach誘導的收縮后的血管舒張。而AICAR處理3周的小鼠頸總動脈結(jié)扎模型，其新生內(nèi)膜的形成受到明顯的抑制。
　　 [結(jié)論]1.AMPK