MitoKATP和A2AR與低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖關(guān)系的研究.pdf

1、目的:研究線粒體ATP敏感性鉀離子通道(MitoKATP)和A2AR與低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)增殖關(guān)系。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)利用離體培養(yǎng)PASMCs為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)分7組:正常對(duì)照組、低氧組(hypoxia，CH)、CH+CGS（A2AR選擇性激動(dòng)劑）組、CH+DIA（二氮嗪，MitoKATP通道開放劑）組、CH+5-HD（5-羥基癸酸鹽，

2、MitoKATP通道阻滯劑）組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組。CCK-8染色法檢測(cè)各組PASMCs增殖情況。利用激光共聚焦顯微鏡羅丹明123(R-123)熒光染色法檢測(cè)各組PASMCs線粒體膜電位(△Ψm);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組PASMCsA2AR、Bcl-2、Bax mRNA表達(dá);Western-Blot法檢測(cè)各組PASMCs A2AR蛋白的表達(dá)及其線粒體與胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C的蛋白含量。
　　 結(jié)果:<

3、br>　　 1.各組CCK-8的吸光度(absorbance，A)值，低氧組較對(duì)照組升高，CH+CGS組、CH+CGS+5-HD組較低氧組下降（P均＜0.05）。表明低氧情況下，PASMCs增殖，CGS及CGS聯(lián)合5-HD均可顯著減少低氧誘導(dǎo)的PASMCs增殖。
　　 2.各組R-123熒光強(qiáng)度，低氧組較對(duì)照組增強(qiáng)，CH+CGS組、CH+CGS+5-HD組較低氧組減弱（（P均＜0.05）。表明低氧情況下，PASMCs線粒體膜電

4、位升高，CGS及CGS聯(lián)合5-HD可以明顯減輕低氧誘導(dǎo)線粒體膜電位升高。
　　 3.A2AR mRNA表達(dá)量，低氧組較對(duì)照組升高;A2AR mRNA和蛋白表達(dá)量，CH+CGS組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組較低氧組均升高(P均＜0.05)。
　　 4.細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)量:CH+CGS組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組較低氧組胞漿內(nèi)的含量增加，線粒體內(nèi)含量減少（P均＜0.05）。

5、r>　　 5.低氧組較對(duì)照組，Bax mRNA表達(dá)下降，Bcl-2 mRNA表達(dá)升高;CH+CGS組、CH+CGS+DIA組、CH+CGS+5-HD組較低氧組，Bax mRNA表達(dá)量升高，Bcl-2 mRNA表達(dá)量下降（P均＜0.05）。
　　 結(jié)論:上調(diào)A2AR表達(dá)，可能通過阻斷低氧誘導(dǎo)MitoKATP開放，降低線粒體膜電位，促進(jìn)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞線粒體途徑凋亡，從而抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖。提示激活A(yù)2AR有望成為研究低氧