性激素對人網(wǎng)膜前脂肪細胞分泌瘦素和脂聯(lián)素的影響.pdf

1、目的：通過體外原代培養(yǎng)人大網(wǎng)膜前脂肪細胞，并誘導其分化為成熟脂肪細胞，研究這一過程中性激素對其分泌瘦素和脂聯(lián)素的影響。 方法： 1、選擇擇期開腹手術病人的新鮮脂肪組織，要求無全身代謝及內分泌疾病，無服用干預糖及脂肪代謝的藥物史。年齡范圍(40±8)歲，體重指數(shù)(BMI)＜25kg/m2。 2、采用膠原酶消化的方法分離培養(yǎng)人大網(wǎng)膜前脂肪細胞并誘導其分化，通過對細胞形態(tài)學的觀察及油紅O脂肪染色抽提法對細胞進行鑒定，觀

2、察原代培養(yǎng)人前脂肪細胞增殖和分化的過程。 3、分別在前脂肪細胞增殖和分化過程中隔日收集基礎組、分化組及性激素干預組的細胞上清液，用酶聯(lián)免疫吸附法同批檢測所收集細胞上清液中瘦素和脂聯(lián)素蛋白含量。 4、待前脂肪細胞誘導分化為成熟脂肪細胞后分別用不同濃度的雌二醇和睪酮干預24h同時收集細胞上清液，用酶聯(lián)免疫吸附法同批檢測所收集細胞上清液中瘦素和脂聯(lián)素蛋白含量。 5、統(tǒng)計學處理：分析結果用“均數(shù)±標準差”表示，P<0.0

3、5有統(tǒng)計學意義。 結果： 1、成功培養(yǎng)了原代人網(wǎng)膜前脂肪細胞。前脂肪細胞形態(tài)與成纖維細胞相似，人工誘導分化后，第4天左右可見胞漿內出現(xiàn)反光的脂質小滴，隨分化進程脂滴逐漸增多，16天左右大部分分化為成熟脂肪細胞。 2、前脂肪細胞增殖期可檢測到低水平的瘦素分泌。在分化期，瘦素分泌量隨誘導分化進程而持續(xù)增多，于第16天達高峰，之后保持高水平分泌狀態(tài)至誘導分化完成。雌二醇干預組各時間段的瘦素分泌水平較分化組有明顯的升高，

4、而睪酮干預組則明顯降低。前脂肪細胞增殖期始終未檢測到脂聯(lián)素的分泌，在分化誘導到第5天才檢測到低水平的分泌，此時倒置顯微鏡下已可觀察到有內含脂滴的脂肪細胞出現(xiàn)，第11天分泌量達最高峰，第16天分泌量可見明顯下降。而雌二醇和睪酮干預組各時間段的脂聯(lián)素分泌水平較分化組均明顯降低。 3、雌二醇對脂肪細胞分泌的瘦素有促進作用，而高濃度的睪酮對瘦素的分泌有抑制作用。 4、雌二醇和睪酮對脂肪細胞分泌的脂聯(lián)素均有抑制作用。 結論