糖基化終末產(chǎn)物對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素分泌的影響.pdf

1、目的：本研究通過(guò)觀察在糖尿病機(jī)體內(nèi)含量明顯升高的糖基化終末產(chǎn)物（Advanced glycation end product，AGE）對(duì)小鼠3T3-Ll細(xì)胞中脂聯(lián)素（Adiponectin，APN）mRNA及蛋白表達(dá)的影響，來(lái)探討AGE致動(dòng)脈粥樣硬化的可能作用途徑，以便為糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的防治研究提供更多的理論支持。
　　 方法：糖孵育法[1]制備AGE-BSA，熒光分光光度計(jì)測(cè)量其熒光值，BSA作對(duì)照。將小鼠3T3-L1前脂

2、肪細(xì)胞體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細(xì)胞。用含不同濃度梯度（50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml）AGE的培養(yǎng)液對(duì)成熟的脂肪細(xì)胞體外培養(yǎng)48h，以PBS和BSA作為陰性對(duì)照，分別收集細(xì)胞和上清液，用RT-PCR方法測(cè)量APN mRNA的表達(dá)，ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)液中APN的分泌情況。
　　 結(jié)果：1）熒光分光光度計(jì)測(cè)得AGE-BSA組的熒光值12.25遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于BSA組的熒光值0.42（分別稀釋10倍后），符合AG

3、E的熒光特性。2）3T3-L1前脂肪細(xì)胞體外分化成熟后，高倍鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)到明顯的脂滴，油紅O染色可見(jiàn)胞漿明顯著紅色。3）AGE干預(yù)成熟的脂肪細(xì)胞后，APN的mRNA水平較對(duì)照組明顯下降，而B(niǎo)SA對(duì)照組與PBS對(duì)照組APN mRNA的表達(dá)無(wú)差異，用50μg/ml AGE干預(yù)脂肪細(xì)胞后，APN mRNA的表達(dá)較對(duì)照組減少（P<0.05），當(dāng)AGE濃度達(dá)100μg/ml和150μg/ml時(shí)，APN mRNA的表達(dá)較對(duì)照組有顯著差異（P<