n-6-n-3多不飽和脂肪酸構成對3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素和PPARγ表達的調(diào)節(jié)研究.pdf

1、背景：
　　 隨著經(jīng)濟發(fā)展、生活水平的提高，生活方式的改變和生活節(jié)奏的加快，肥胖的發(fā)病率近年來呈現(xiàn)急劇上升的趨勢，并且由肥胖導致的代謝紊亂疾病的發(fā)病率也隨之增加，肥胖及其相關疾病的研究已經(jīng)成為醫(yī)學界和營養(yǎng)學界關注的熱點之一。近年來的研究表明，脂肪組織不僅可以儲存能量，還具有內(nèi)分泌的功能。脂聯(lián)素(adiponectin，APN)是近年來新發(fā)現(xiàn)的由脂肪細胞分泌的細胞因子，在調(diào)節(jié)糖代謝和能量平衡、改善胰島素敏感性和抗動脈粥樣硬化等方面

2、的作用倍受關注。n-6和n-3系列多不飽和脂肪酸(PUAFs)在調(diào)節(jié)糖脂代謝和脂肪細胞分化中發(fā)揮重要作用，現(xiàn)有研究也大多數(shù)支持改變膳食脂肪酸構成能夠改善由肥胖引起的相關代謝性疾病，并且觀察到總是伴隨著體內(nèi)脂聯(lián)素水平的改變。但n-6/n-3多不飽和脂肪酸構成對脂聯(lián)素的調(diào)節(jié)作用尚不明確。
　　 目的：
　　 本實驗擬通過體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪細胞為研究對象，觀察不同比例、不同濃度的n-6/n-3多不飽和脂肪酸構成對脂聯(lián)素

3、表達的影響，發(fā)現(xiàn)能提高脂聯(lián)素表達的適宜脂肪酸比例和濃度，并初步探討n-6/n-3多不飽和脂肪酸調(diào)節(jié)脂聯(lián)素表達的分子機理。其研究結果將為肥胖相關疾病的預防和治療提供新的思路和科學依據(jù)，也為確定膳食中n-6/n-3脂肪酸的適宜構成提供新的重要的參考依據(jù)，有重要的理論價值和現(xiàn)實意義。
　　 方法：
　　 1.以體外培養(yǎng)并誘導分化成熟的3T3-L1脂肪細胞為研究對象，n-6系的亞油酸(Linoleic acid，LA)、n-3系

4、的二十二碳六烯酸(Docosahe--xaenoic acid，DHA)為受試物，觀察經(jīng)不同比例（LA/DHA為1∶1，5∶1，10∶1，20∶1和30∶1）;一定濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的LA、DHA處理后，3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素及PPARγ基因表達水平的變化（Realtime PCR相對定量法），觀察各受試物是否通過PPARγ來影響脂聯(lián)素的表達;
　　 2.觀察經(jīng)不同比例（LA/DHA為1∶

5、1，5∶1，10∶1，20∶1和30∶1）;一定濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的LA、DHA處理后，3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素蛋白表達水平的變化（western-blotting相對定量法）;
　　 3.所得數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標準差((x)±s)表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0分析。如果方差齊，組間比較采用單因素方差分析(One Way ANOVA)，兩兩比較采用LSD T-test或dunnett T-

6、test，如果方差不齊，運用Welch法和Dunnett's T3法分別進行組間比較和兩兩比較。相關性分析采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異顯著。
　　 結果：
　　 1.n-6/n-3PUFAs構成對脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達的影響
　　 1.1 n-6/n-3PUFAs為1∶1時對脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-

7、3PUFAs(1∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，各濃度組脂聯(lián)素mRNA表達均增加，分別比對照組增加118.18％(p=0.001)、152.73％(p=0.000)、154.55％(p=0.000)、56.36％(p＞0.05)、38.18％(p＞0.05);在25、50、100μmol/L時表達增加最顯著。
　　 在濃度為50、100μmol/L時，PPARγ mRNA表達顯著增加，與對照組相比分別增108.33

8、％(p=0.008)和80.56％(p=0.045);其余濃度表達無顯著差異。經(jīng)Pearson相關分析，脂聯(lián)素mRNA表達與PPARγ mRNA表達總體趨勢存在顯著正相關關系。相關系數(shù)r=0.863，P=0.000。
　　 1.2 n-6/n-3PUFAs為5∶1時對脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(5∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細

9、胞24h，在濃度為25、50、100μmol/L時，脂聯(lián)素mRNA的表達均高于對照組，在25μmol/L時最為顯著，比對照組增加66％(p=0.000);隨著濃度的增加，脂聯(lián)素mRNA表達下降，在400μmol/L時顯著低于對照組，減少78％(p=0.000)。
　　 在濃度為25、50μmol/L時，PPARγ mRNA的表達增加，在50μmol/L顯著增加，比對照組增加64.36％(p=0.003);隨著濃度的繼續(xù)增加，PP

10、ARγ mRNA表達均下降，在200、400μmol/L時，分別比對照組減少44.55％(p=0.029)和55.45％(p=0.008)。經(jīng)Pearson相關分析，脂聯(lián)素mRNA表達與PPARγ mRNA表達總體趨勢存在顯著正相關關系。相關系數(shù)r=0.590，P=0.010。
　　 1.3 n-6/n-3PUFAs為10∶1時對脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的

11、n-6/n-3PUFAs(10∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，在濃度為50μmol/L時脂聯(lián)素mRNA的表達顯著增加，比對照組增加50.85％(p=0.019);其他濃度組PPARγ mRNA表達均下降，當濃度為200、400μmol/L時，表達顯著下降，比對照組分別減少13.56％(p=0.001)和77.97％(p=0.001)。
　　 在濃度為50μmol/L時，PPARγ mRNA的表達比對照組增加38.1

12、0％(p＞0.05);其他濃度組PPARγ mRNA表達均下降，當濃度為400μmol/L時，表達顯著下降，比對照組減少65.48％(p=0.003)。經(jīng)Pearson相關分析，脂聯(lián)素mRNA表達與PPARγ mRNA表達總體趨勢存在顯著正相關關系。相關系數(shù)r=0.791，P=0.000。
　　 1.4 n-6/n-3PUFAs為20∶1時對脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μm

13、ol/L)的n-6/n-3PUFAs(20∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，在濃度為50μmol/L時，脂聯(lián)素mRNA的表達增加，但無顯著差異;其他濃度組脂聯(lián)素的表達均下降，當濃度為200、400μmol/L時，表達顯著下降，比對照組分別減少13.56％(p=0.004)和77.97％(p=0.002)。
　　 在濃度為50μmol/L時，PPARγ mRNA的表達增加，但無顯著差異;其他濃度組PPAR

14、γ mRNA表達均下降，當濃度為200、400μmol/L時，表達顯著下降，比對照組分別減少50％(p=0.004)和60.29％(p=0.001)。經(jīng)Pearson相關分析，脂聯(lián)素mRNA表達與PPARγ mRNA表達總體趨勢存在顯著正相關關系。相關系數(shù)r=0.970, P=0.000。
　　 1.5 n-6/n-3PUFAs為30∶1時對脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μm

15、ol/L)的n-6/n-3PUFAs(30∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，各濃度組脂聯(lián)素的表達均下降，隨著濃度的增加，下降趨勢越明顯，當濃度為50、100、200和400μmol/L時，表達顯著下降，比對照組分別減少44.83％(p=0.012)、49.14％(p=0.006)、48.28％(p=0.008)和63.97％(p=0.001)。
　　 與對照組相比，各濃度組PPARγ mRNA的表達均顯

16、著下降，隨著濃度的增加，下降趨勢越明顯，比對照組分別減少27.59％(p=0.001)、22％(p=0.001)、37％(p=0.000)、50％(p=0.000)和56％(p=0.000)。
　　 經(jīng)Pearson相關分析，脂聯(lián)素mRNA表達與PPARγ mRNA表達總體趨勢存在顯著正相關關系。相關系數(shù)r=0.793，P=0.000。
　　 2.n-6/n-3PUFAs構成對3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素蛋白表達的影響

17、r>　　 2.1 n-6/n-3PUFAs為1∶1時對脂聯(lián)素蛋白表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(1∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，各濃度組脂聯(lián)素的表達均增加，50、200、400μmol/L處理組脂聯(lián)素蛋白表達與對照組相比略有升高，但無統(tǒng)計學差異(p＞0.05);25、100μmol/L處理組對照組相比，脂聯(lián)素蛋白表達分別顯著增加24.77％

18、(P＜0.05)、28.50％(P＜0.05)。
　　 2.2 n-6/n-3PUFAs為5∶1時對脂聯(lián)素蛋白表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(5∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，除400μmol/L濃度組脂聯(lián)素蛋白的表達略有降低(5.88％)外，其他各濃度組脂聯(lián)素蛋白的表達均增加，50、100、200μmol/L處理組脂聯(lián)素蛋白表達與對照

19、組相比略有升高，但無統(tǒng)計學差異(p＞0.05);25μmol/L處理組對照組相比，脂聯(lián)素蛋白表達顯著增加15.11％(P＜0.05)。
　　 2.3 n-6/n-3PUFAs為10∶1時對脂聯(lián)素蛋白表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(10∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，在濃度為25、50、100μmol/L時，脂聯(lián)素蛋白的表達均高于對照組，

20、在100μmol/L時最為顯著，比對照組增加14.32％(P＜0.05);隨著濃度的增加，脂聯(lián)素蛋白的表達下降，在400μmol/L時顯著低于對照組，減少16.21％(P＜0.05)。
　　 2.4 n-6/n-3PUFAs為20∶1時對脂聯(lián)素蛋白表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(20∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，在濃度為25、50、1

21、00、200μmol/L時，脂聯(lián)素蛋白的表達無顯著差異，隨著濃度的增加，脂聯(lián)素蛋白表達下降，在400μmol/L時顯著低于對照組，減少26.57％(P＜0.05)。
　　 2.5 n-6/n-3PUFAs為30∶1時對脂聯(lián)素蛋白表達的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(30∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細胞24h，與對照組相比，各濃度組脂聯(lián)素蛋白的表達均降低，在50、1

22、00、200、400μmol/L時顯著低于對照組，分別減少51.54％(P=0.000)、52.04％(P=0.000)、62.34％(P=0.000)、61.93％(P=0.000)。
　　 結論：
　　 1.n-6/n-3PUFAs構成比的不同對3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素表達的影響不同，在n-6/n-3PUFAs構成比為1∶1和5∶1時顯著上調(diào)脂聯(lián)素的表達，隨著n-6/n-3PUFAs構成比的增加，對脂聯(lián)素表達的促進

23、作用逐漸下降，在30比1時完全抑制脂聯(lián)素的表達。
　　 2.在一定濃度范圍(25、50、100μmol/L)內(nèi)，n-6/n-3PUFAs能上調(diào)3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素的表達，呈劑量依賴關系;在200μmol/L濃度以上時多呈現(xiàn)為抑制脂聯(lián)素表達。n-3PUFAs比n-6PUFAs更能促進脂聯(lián)素的表達。
　　 3.經(jīng)相關性分析發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素與PPARγ基因表達之間存在顯著正相關關系，提示n-6/n-3PUFAs影響脂聯(lián)素的表

24、達有可能通過激活或抑制PPARγ的表達來實現(xiàn)。
　　 4.本研究結果提示脂肪酸的構成、濃度等都是影響脂聯(lián)素表達的重要因素，n-6PUFAs在適當范圍（n-6/n-3PUFAs為1∶1和5∶1）內(nèi)可能上調(diào)脂聯(lián)素PPARγ基因的表達，但是隨著n-6/n-3PUFAs比例的增加主要表現(xiàn)為抑制作用，而n-3PUFAs則主要表現(xiàn)為上調(diào)脂聯(lián)素和PPARγ基因的表達，由此可以推測可以通過調(diào)整膳食脂肪酸n-6/n-3PUFAs構成比、濃度等來增