不同比率n-6-n-3多不飽和脂肪酸對動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的干預(yù)機(jī)制探討.pdf

1、心腦血管疾病是目前危害人類健康的主要?dú)⑹?，而高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化( atherosclerosis，AS)是上述疾病的病理生理基礎(chǔ)。據(jù)世界衛(wèi)生組織2001年統(tǒng)計(jì)，全球因心腦血管疾病導(dǎo)致的死亡人數(shù)占全部死亡人數(shù)的30％，且在逐年遞增。血脂異常（高脂血癥）是AS和冠心病的主要危險(xiǎn)因素之一。日常膳食結(jié)構(gòu)不合理是誘發(fā)血脂異常的重要因素。已有的研究表明：炎癥貫穿于AS發(fā)生發(fā)展的各個(gè)階段，炎癥機(jī)制已被多數(shù)學(xué)者所認(rèn)可。
　　 多不飽和脂肪酸

2、（polyunsaturated fatty acids，PUFAs）是人體必需脂肪酸，自身不能夠合成，必需從外源食物中獲得，根據(jù)不飽和鍵的位置分為n-6系和n-3系PUFAs。膳食脂肪酸構(gòu)成比，尤其是n-6與n-3 PUFAs比值對血脂代謝及免疫功能有不同影響，因此，膳食PUFAs攝入量及兩者的最佳比例至關(guān)重要。目前各國關(guān)于膳食脂肪酸構(gòu)成比的推薦值不盡相同，而且仍存在爭議，其在體內(nèi)對脂代謝和炎癥反應(yīng)的調(diào)控規(guī)律尚不清楚。對于高脂血癥以及

3、AS患者，他們的日常膳食脂肪組成將影響著病情的發(fā)展進(jìn)程，而對于已經(jīng)患有高脂血癥和AS相關(guān)疾病人群的日常膳食n-3與n-6 PUFAs最佳比率仍不清楚。
　　 ApoE基因缺失(apoE deficient，apoE-/-)小鼠在普通標(biāo)準(zhǔn)飲食條件下能夠自發(fā)產(chǎn)生AS病變，且發(fā)病過程與人類AS極為相似，是研究人類AS的理想模型，為研究人類AS的發(fā)病機(jī)理以及干預(yù)治療提供了極大的方便。因此，本研究以8周齡雄性apoE-/-小鼠為模型，模擬

4、人類家族性III型高脂蛋白血癥和AS患者，通過調(diào)整膳食中n-6/n-3 PUFAs不同比率（分別為組1：1.28；組2：5.03；組3：9.98，組4：68.26）干預(yù)小鼠6周和13周，從脂代謝、炎癥反應(yīng)等方面探討不同比率n-6/n-3 PUFAs不同干預(yù)時(shí)間對AS發(fā)展的影響及分子機(jī)制，以期為上述患病人群的日常膳食提供理論依據(jù)。
　　 本研究利用血生化分析、ELISA、氣-質(zhì)聯(lián)、超速離心、比色法等分析技術(shù)，real-timeRT

5、-PCR以及Westem-Blot等分子生物學(xué)技術(shù)，冷凍切片、常規(guī)病理染色等病理形態(tài)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)技術(shù)，對不同飲食干預(yù)小鼠血脂和血清炎癥因子水平、主動(dòng)脈AS病變、肝臟脂質(zhì)等進(jìn)行分析，同時(shí)對影響脂代謝相關(guān)的含載脂蛋白BlOO（apolipoprotein BlOO，apoBIOO）脂蛋白代謝、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)代謝以及炎癥反應(yīng)等相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行了系統(tǒng)分析，結(jié)果如下：
　　 1.不

6、同比率n-6/n-3 PUFAs對apoE-/-小鼠AS的影響
　　 各組小鼠經(jīng)不同比率n-6/n-3 PUFAs飲食干預(yù)，體重增長無顯著差異。小鼠主動(dòng)脈根部以及全長主動(dòng)脈AS斑塊面積分析表明，飲食干預(yù)6周，組3（n-6/n-3 PUFAs為9.98）飲食小鼠具有最低的主動(dòng)脈根部斑塊面積，此時(shí)AS處于脂質(zhì)條紋期。低比率n-6/n-3 PUFAs(組1：1.28)飲食干預(yù)13周能夠顯著抑制apoE-/-小鼠主動(dòng)脈根部以及全長主動(dòng)脈

7、AS病變，此時(shí)AS處于纖維斑塊病變期。高比率n-6/n-3 PUFAs飲食（組4：68.26）主動(dòng)脈根部及全長主動(dòng)脈AS病變程度最重。而且隨著飲食中n-6 PUFAs含量的增加，病變程度逐漸加重。
　　 2.不同比率n-6/n-3 PUFAs對apoE-/-小鼠AS干預(yù)機(jī)制探討
　　 (1)不同比率n-6/n-3 PUFAs對apoE-/-小鼠脂質(zhì)代謝的影響：
　　 (2)不同比率n-6/n-3 PUFAs對ap

8、oE-/-小鼠炎癥因子的影響
　　 綜上所述，不同比率n-6/n-3 PUFAs飲食干預(yù)apoE-/-小鼠6周，低比率n-6/n-3 PUFAs飲食能夠顯著降低肝臟脂肪酸和膽固醇的合成以及抑制apoB100的表達(dá)，但同時(shí)降低了LDLR和LRP的表達(dá)，結(jié)果導(dǎo)致沒有降低血清LDL-C水平。然而其主動(dòng)脈根部AS病變與血清LDL-C趨勢是一致的，組3(n-6/n-3 PUFAs為9.98)飲食具有最低的LDL-C水平和最輕的AS病變，因

9、此我們推測在AS發(fā)生早期，血脂水平在AS發(fā)生中起重要作用，飲食n-6/n-3 PUFAs比率為9.98時(shí)能夠通過控制LDL-C水平，并在一定程度上抑制AS的發(fā)展。對HDL-C代謝相關(guān)因子的分析表明，高比率n-6/n-3 PUFAs（組4：68.26）飲食顯著升高HDL-C水平，但沒有抑制AS發(fā)展，說明由高比率n-6/n-3 PUFAs飲食產(chǎn)生的高水平HDL-C在apoE-/-小鼠中并沒有發(fā)揮抗AS的作用。然而飲食干預(yù)至13周，隨著AS的

10、進(jìn)一步發(fā)展，組3飲食干預(yù)小鼠仍具有最低的LDL-C水平，但此時(shí)處于纖維斑塊病變時(shí)期的AS病變并未隨血清LDL-C水平的降低而減輕，而低比率n-6/n-3 PUFAs（組1：1.28）飲食具有最輕的AS病變，說明在AS發(fā)展的中后期，低比率n-6/n-3 PUFAs對AS的抑制作用獨(dú)立于其對血脂水平的影響，通過主動(dòng)脈ABCA1基因的表達(dá)及肝臟、脾臟、主動(dòng)脈炎癥相關(guān)基因的表達(dá)分析，推測低比率n-6/n-3 PUFAs飲食抗apoE-/-小鼠A