膳食n-3-n-6多不飽和脂肪酸構(gòu)成比對(duì)大鼠血脂影響及其機(jī)制研究.pdf

1、許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床調(diào)查中都已證實(shí)，高血脂癥與許多慢性代謝性疾病密切相關(guān)。動(dòng)植物油脂中所含的必須脂肪酸對(duì)保持人體健康有著重要的生理作用。膳食多不飽和脂肪酸（PolyunsaturatedfattyacidsPUFA）具有影響血脂代謝的作用，其中具有功效的類型為n-3與n-6。然而，單一攝入某種植物油的脂肪酸構(gòu)成模式均不合理。目前，聯(lián)合國(guó)糧食農(nóng)業(yè)組織（FAO）提出脂肪酸n-6/n-3營(yíng)養(yǎng)素推薦量比值為5～10:1。在當(dāng)今的飲食條件下，n-6

2、PUFAs一般是過(guò)量的，而n-3PUFAs嚴(yán)重不足,然而學(xué)術(shù)界至今對(duì)二者合理的比值仍有爭(zhēng)論。
　　已有研究表明，PUFA發(fā)揮改善血脂作用至少部分是通過(guò)激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activatedproteinkinaseAMPK）。AMPK的作用底物就包括羥甲基戊二酰單酰輔酶A（HMGR）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、激素敏感脂酶(HSL)、糖原合成酶等。AMPK是進(jìn)食行為的主要調(diào)控因子。人們對(duì)下丘腦神經(jīng)元AMPK對(duì)食欲的影

3、響機(jī)制,仍不甚了解。但下丘腦AMPK調(diào)控食欲至少是通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)肽Y(NPY)和AGRP等促食欲因子的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。AMPK活性變化可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)丙二酰輔酶A的濃度和肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶1（CPT-1）的活性影響食欲。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的PUFA比例一個(gè)使用推薦比值，另一個(gè)使用較高比例的n-3，以糾正飲食中n-6過(guò)高的狀況。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給SD大鼠不同脂肪酸配比膳食，以得到合理n-3/n-6脂肪酸配比，并探索PUFA是否能夠通過(guò)外周和中樞作用于AMPK通路調(diào)

4、節(jié)全身營(yíng)養(yǎng)代謝，為人們用PUFA的食物預(yù)防和治療高血脂、心血管疾病提供科學(xué)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法
　　58只清潔級(jí)雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，尾靜脈采血測(cè)得血清總膽固醇（TC）水平后隨機(jī)分為6組，分別為:空白對(duì)照組9只，高脂對(duì)照組9只，高脂1:1組10只，高脂1:5組10只，低脂1:1組10只，低脂1:5組10只。實(shí)驗(yàn)期為45d。大鼠單籠喂養(yǎng)，飲去離子水，根據(jù)體重給予不同需要飼料，六組飼料分別

5、為基礎(chǔ)飼料；高脂飼料；n-3/n-6為1:1的高脂飼料（n-3為亞麻酸油，含60％α亞麻酸；n-6為琉璃苣油，含20％γ亞麻酸，40％亞油酸）；n-3/n-6為1:5的高脂飼料；n-3/n-6為1:1的低脂飼料；n-3/n-6為1:5的低脂飼料。記錄大鼠每日進(jìn)食量和體重變化。分別于實(shí)驗(yàn)前一天，實(shí)驗(yàn)第15d，第30d尾靜脈取血，分離血清，37℃水浴30min，4000r/min離心分離血清,用試劑盒檢測(cè)TG、TC、LDL-C、HDL-C水

6、平。實(shí)驗(yàn)第45d時(shí)，禁食12h，乙醚麻醉后處死大鼠，迅速取肝臟及下丘腦組織，生理鹽水沖洗，濾紙拭干，凍存于液氮中備測(cè)mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)。取皮下脂肪、腹膜下脂肪、睪周脂肪、腎周脂肪分別稱重，計(jì)算脂體比。實(shí)時(shí)RT-PCR定量分別檢測(cè)肝中PPAR-γ、AMPK-α2mRNA及下丘腦中NPY、AMPK-α2mRNA表達(dá)水平。Westernblot分別檢測(cè)肝中及下丘腦中AMPKα及磷酸化AMPKα蛋白濃度。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1．不

7、同n-3/n-6配比脂肪酸對(duì)大鼠血脂水平的影響
　　實(shí)驗(yàn)第45d，高脂組TC、TG、LDL-C水平均高于其他五組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；45天時(shí)空白組和高脂1:1組比高脂組HDL-C有顯著差異（P＜0.05）?？梢?jiàn)PUFA對(duì)大鼠血脂水平有顯著改善。
　　2．不同n-3/n-6配比脂肪酸對(duì)大鼠體重及脂體比的影響
　　實(shí)驗(yàn)45d后，各組動(dòng)物體重都有所增加。高脂組與其他五組體重相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

8、05）。高脂1:5和低脂1:5組皮下脂肪與高脂組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。添加PUFA的4組腹膜下脂肪、睪周脂肪、腎周脂肪比率及脂體比與高脂組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明PUFA能夠降低大鼠體重和體脂，尤其是對(duì)降低內(nèi)臟脂肪積累的作用明顯。
　　3．不同n-3/n-6配比脂肪酸對(duì)大鼠攝食量的影響：
　　實(shí)驗(yàn)第12天開(kāi)始，PUFA四個(gè)比例組大鼠食欲明顯減少，與高脂組和空白組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、，（P＜0.05）且作用時(shí)間比較持久。表明PUFA能降低大鼠食欲。
　　4．不同n-3/n-6配比脂肪酸對(duì)大鼠AMPK-α2和PPAR-γ及NPYmRNA表達(dá)的影響：
　　給予不同配比脂肪酸膳食45天，添加PUFA的四個(gè)比例組肝AMPK-α2及PPAR-γmRNA表達(dá)水平均與空白對(duì)照組相比有所下降，但和高脂組相比表達(dá)有顯著升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明PUFA能增強(qiáng)肝AMPK和PPAR-γmRNA的表達(dá)。但

10、是四個(gè)比例組下丘腦AMPK-α2及NPYmRNA表達(dá)與高脂組和空白組相比均顯著降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），高脂1:5組與低脂1:1組有顯著差別（P＜0.05），說(shuō)明PUFA能抑制下丘腦中AMPK及NPYmRNA的表達(dá)。
　　5．不同n-3/n-6配比脂肪酸對(duì)大鼠AMPK-α及磷酸化AMPK蛋白的表達(dá)的影響：
　　給予不同配比脂肪酸膳食45d，四個(gè)比例組（高脂1:1、高脂1:5、低脂1:1、低脂1:5）肝AMP

11、K-α亞基總蛋白表達(dá)水平均與空白組相比明顯增加，高脂組AMPK活性明顯降低，高脂兩個(gè)比例組該活性低于空白組和低脂兩個(gè)比例組，且低脂1:1組AMPK-α活性最強(qiáng)，說(shuō)明PUFA能增強(qiáng)肝AMPK蛋白活性表達(dá)。然而在下丘腦，四個(gè)PUFA比例組下丘腦AMPK-α亞基總蛋白表達(dá)水平均比空白組顯著降低；高脂組與空白組相比該表達(dá)無(wú)顯著差異。四個(gè)PUFA比例組下丘腦AMPK-α磷酸化活性均明顯低于空白組及高脂組。低脂1:1組和低脂1:5組AMPK-α磷酸

12、化表達(dá)水平明顯低于高脂1:1組和高脂1:5組，高脂組AMPK活性與空白組相比該表達(dá)無(wú)顯著差異。說(shuō)明PUFA能抑制下丘腦AMPK蛋白活性表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　n-3/n-61:1與1:5兩個(gè)比例的PUFA膳食均改善大鼠高血脂并降低脂肪積累，可能是通過(guò)增加肝中AMPK表達(dá)及PPAR-γ等脂肪酸氧化基因表達(dá)，并抑制下丘腦食欲相關(guān)基因NPY及AMPK表達(dá)有關(guān)。
　　但是由于脂肪代謝的變化是多種因素共同作用的結(jié)果，因此要闡明