膳食n-3-n-6多不飽和脂肪酸構(gòu)成比對大鼠血脂影響及其機(jī)制研究.pdf

1、許多動物實(shí)驗(yàn)和臨床調(diào)查中都已證實(shí)，高血脂癥與許多慢性代謝性疾病密切相關(guān)。動植物油脂中所含的必須脂肪酸對保持人體健康有著重要的生理作用。膳食多不飽和脂肪酸（PolyunsaturatedfattyacidsPUFA）具有影響血脂代謝的作用，其中具有功效的類型為n-3與n-6。然而，單一攝入某種植物油的脂肪酸構(gòu)成模式均不合理。目前，聯(lián)合國糧食農(nóng)業(yè)組織（FAO）提出脂肪酸n-6/n-3營養(yǎng)素推薦量比值為5～10:1。在當(dāng)今的飲食條件下，n-6

2、PUFAs一般是過量的，而n-3PUFAs嚴(yán)重不足,然而學(xué)術(shù)界至今對二者合理的比值仍有爭論。
　　已有研究表明，PUFA發(fā)揮改善血脂作用至少部分是通過激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activatedproteinkinaseAMPK）。AMPK的作用底物就包括羥甲基戊二酰單酰輔酶A（HMGR）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、激素敏感脂酶(HSL)、糖原合成酶等。AMPK是進(jìn)食行為的主要調(diào)控因子。人們對下丘腦神經(jīng)元AMPK對食欲的影

3、響機(jī)制,仍不甚了解。但下丘腦AMPK調(diào)控食欲至少是通過調(diào)節(jié)神經(jīng)肽Y(NPY)和AGRP等促食欲因子的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。AMPK活性變化可通過細(xì)胞內(nèi)丙二酰輔酶A的濃度和肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶1（CPT-1）的活性影響食欲。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的PUFA比例一個使用推薦比值，另一個使用較高比例的n-3，以糾正飲食中n-6過高的狀況。本實(shí)驗(yàn)通過給SD大鼠不同脂肪酸配比膳食，以得到合理n-3/n-6脂肪酸配比，并探索PUFA是否能夠通過外周和中樞作用于AMPK通路調(diào)

4、節(jié)全身營養(yǎng)代謝，為人們用PUFA的食物預(yù)防和治療高血脂、心血管疾病提供科學(xué)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法
　　58只清潔級雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，尾靜脈采血測得血清總膽固醇（TC）水平后隨機(jī)分為6組，分別為:空白對照組9只，高脂對照組9只，高脂1:1組10只，高脂1:5組10只，低脂1:1組10只，低脂1:5組10只。實(shí)驗(yàn)期為45d。大鼠單籠喂養(yǎng)，飲去離子水，根據(jù)體重給予不同需要飼料，六組飼料分別

5、為基礎(chǔ)飼料；高脂飼料；n-3/n-6為1:1的高脂飼料（n-3為亞麻酸油，含60％α亞麻酸；n-6為琉璃苣油，含20％γ亞麻酸，40％亞油酸）；n-3/n-6為1:5的高脂飼料；n-3/n-6為1:1的低脂飼料；n-3/n-6為1:5的低脂飼料。記錄大鼠每日進(jìn)食量和體重變化。分別于實(shí)驗(yàn)前一天，實(shí)驗(yàn)第15d，第30d尾靜脈取血，分離血清，37℃水浴30min，4000r/min離心分離血清,用試劑盒檢測TG、TC、LDL-C、HDL-C水

6、平。實(shí)驗(yàn)第45d時，禁食12h，乙醚麻醉后處死大鼠，迅速取肝臟及下丘腦組織，生理鹽水沖洗，濾紙拭干，凍存于液氮中備測mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)。取皮下脂肪、腹膜下脂肪、睪周脂肪、腎周脂肪分別稱重，計(jì)算脂體比。實(shí)時RT-PCR定量分別檢測肝中PPAR-γ、AMPK-α2mRNA及下丘腦中NPY、AMPK-α2mRNA表達(dá)水平。Westernblot分別檢測肝中及下丘腦中AMPKα及磷酸化AMPKα蛋白濃度。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1．不

7、同n-3/n-6配比脂肪酸對大鼠血脂水平的影響
　　實(shí)驗(yàn)第45d，高脂組TC、TG、LDL-C水平均高于其他五組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；45天時空白組和高脂1:1組比高脂組HDL-C有顯著差異（P＜0.05）?？梢奝UFA對大鼠血脂水平有顯著改善。
　　2．不同n-3/n-6配比脂肪酸對大鼠體重及脂體比的影響
　　實(shí)驗(yàn)45d后，各組動物體重都有所增加。高脂組與其他五組體重相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

8、05）。高脂1:5和低脂1:5組皮下脂肪與高脂組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。添加PUFA的4組腹膜下脂肪、睪周脂肪、腎周脂肪比率及脂體比與高脂組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明PUFA能夠降低大鼠體重和體脂，尤其是對降低內(nèi)臟脂肪積累的作用明顯。
　　3．不同n-3/n-6配比脂肪酸對大鼠攝食量的影響：
　　實(shí)驗(yàn)第12天開始，PUFA四個比例組大鼠食欲明顯減少，與高脂組和空白組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、，（P＜0.05）且作用時間比較持久。表明PUFA能降低大鼠食欲。
　　4．不同n-3/n-6配比脂肪酸對大鼠AMPK-α2和PPAR-γ及NPYmRNA表達(dá)的影響：
　　給予不同配比脂肪酸膳食45天，添加PUFA的四個比例組肝AMPK-α2及PPAR-γmRNA表達(dá)水平均與空白對照組相比有所下降，但和高脂組相比表達(dá)有顯著升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明PUFA能增強(qiáng)肝AMPK和PPAR-γmRNA的表達(dá)。但

10、是四個比例組下丘腦AMPK-α2及NPYmRNA表達(dá)與高脂組和空白組相比均顯著降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），高脂1:5組與低脂1:1組有顯著差別（P＜0.05），說明PUFA能抑制下丘腦中AMPK及NPYmRNA的表達(dá)。
　　5．不同n-3/n-6配比脂肪酸對大鼠AMPK-α及磷酸化AMPK蛋白的表達(dá)的影響：
　　給予不同配比脂肪酸膳食45d，四個比例組（高脂1:1、高脂1:5、低脂1:1、低脂1:5）肝AMP

11、K-α亞基總蛋白表達(dá)水平均與空白組相比明顯增加，高脂組AMPK活性明顯降低，高脂兩個比例組該活性低于空白組和低脂兩個比例組，且低脂1:1組AMPK-α活性最強(qiáng)，說明PUFA能增強(qiáng)肝AMPK蛋白活性表達(dá)。然而在下丘腦，四個PUFA比例組下丘腦AMPK-α亞基總蛋白表達(dá)水平均比空白組顯著降低；高脂組與空白組相比該表達(dá)無顯著差異。四個PUFA比例組下丘腦AMPK-α磷酸化活性均明顯低于空白組及高脂組。低脂1:1組和低脂1:5組AMPK-α磷酸

12、化表達(dá)水平明顯低于高脂1:1組和高脂1:5組，高脂組AMPK活性與空白組相比該表達(dá)無顯著差異。說明PUFA能抑制下丘腦AMPK蛋白活性表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　n-3/n-61:1與1:5兩個比例的PUFA膳食均改善大鼠高血脂并降低脂肪積累，可能是通過增加肝中AMPK表達(dá)及PPAR-γ等脂肪酸氧化基因表達(dá)，并抑制下丘腦食欲相關(guān)基因NPY及AMPK表達(dá)有關(guān)。
　　但是由于脂肪代謝的變化是多種因素共同作用的結(jié)果，因此要闡明