五甲基槲皮素(PMQ)對3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素表達的影響及相關機制研究.pdf

1、第一部分PMQ上調(diào)成熟3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素的表達
　　目的：成熟的脂肪細胞是機體脂肪組織中主要的細胞組分，本實驗研究PMQ對成熟的3T3-L1脂肪細胞脂聯(lián)素表達的影響及可能存在的量效關系和時效關系.
　　方法：3T3-L1前脂肪細胞誘導分化成熟后，給予不同濃度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小時，檢測脂肪細胞脂聯(lián)素mRNA和蛋白質表達水平。觀察給予3μM PMQ后0,3,6,12,24,48小時各時

2、間點脂聯(lián)素表達的變化。
　　結果：PMQ上調(diào)成熟3T3-L1脂肪細胞的脂聯(lián)素mRNA及蛋白質表達，此作用呈明顯的濃度和時間依賴性。
　　第二部分 PMQ上調(diào)脂聯(lián)素表達的機制研究
　　目的：研究PMQ增強脂聯(lián)素表達的分子機制.
　　方法：3T3-L1前脂肪細胞分化成熟后，給予不同濃度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小時。分別檢測各組脂肪細胞PPARγ、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白質表達水

3、平；TNF-α和IL-6的分泌水平；AKT的磷酸化水平。觀察PPARγ拮抗劑GW9662（10μM）和PI3K抑制劑wortmannin（100 nM）對PMQ上調(diào)脂聯(lián)素表達作用的影響。
　　結果：①PMQ濃度依賴性促進PPARγmRNA和蛋白質表達。②PMQ對總AKT無明顯影響，但濃度依賴性促進磷酸化AKT的表達。③GW9662和wortmannin本身對脂肪細胞脂聯(lián)素的表達無明顯影響，但能明顯拮抗PMQ增強adiponecti

4、n mRNA和蛋白質表達的作用。④PMQ濃度依賴性降低TNF-α和IL-6 mRNA表達和分泌.
　　結論：PMQ同過增強PPARγ和磷酸化AKT，降低TNF-α和IL-6的表達及分泌增強脂聯(lián)素的表達。
　　第三部分 PMQ對分化過程中脂肪細胞PPARs和脂肪細胞因子表達的影響
　　目的：脂肪細胞的年更新率約為20％，即每一瞬間都有相當比例的細胞處在分化過程中，本實驗研究PMQ對分化過程中脂肪細胞PPARs和脂肪細胞因

5、子表達的影響。
　　方法：對3T3-L1前脂肪細胞進行誘導分化，全程給予PMQ（6天）。分化的第六天提取總RNA和總蛋白，分別檢測PPARs和脂肪細胞因子mRNA表達水平、PPARγ和脂聯(lián)素蛋白質表達水平。
　　結果：①PMQ明顯促進PPARα，PPARβ和PPARγ的mRNA表達水平和PPARγ蛋白質表達；②PMQ明顯促進脂聯(lián)素的mRNA和蛋白質表達；③PMQ明顯降低TNF-α和IL-6 mRNA表達水平；PMQ對FGF-

6、21表達無明顯影響。
　　結論：PMQ促進分化過程中脂肪細胞PPARs表達，促進脂聯(lián)素mRNA和蛋白質表達，抑制IL-6及TNF-αmRNA表達，對FGF-21表達無明顯影響。
　　第四部分5-PBDMA對分化過程中脂肪細胞PPARs和脂肪細胞因子表達的影響
　　目的：研究5-苯氧丁基二甲基芹菜素（5-BPDMA）對分化過程中脂肪細胞PPARs和脂肪細胞因子表達的影響。
　　方法：對3T3-L1前脂肪細胞進行誘導

7、分化，全程給予5-PBDMA（6天）。分化的第六天提取總RNA，檢測PPARs和脂肪細胞因子mRNA表達水平。
　　結果：①5BP-DMA對分化過程中脂肪細胞PPARs家族的mRNA表達無明顯影響；②低濃度的5-PBDMA（0.1,0.3μM）明顯促進脂肪細胞脂聯(lián)素mRNA表達，較高濃度5-PBDMA（3,10μM）抑制脂聯(lián)素mRNA表達；③5-PBDMA明顯抑制IL-6和TNF-αmRNA表達水平，對FGF-21表達無明顯影響。