五甲基槲皮素(PMQ)對3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分PMQ上調(diào)成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素的表達(dá)
　　目的：成熟的脂肪細(xì)胞是機(jī)體脂肪組織中主要的細(xì)胞組分，本實(shí)驗(yàn)研究PMQ對成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素表達(dá)的影響及可能存在的量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系.
　　方法：3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后，給予不同濃度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小時(shí)，檢測脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。觀察給予3μM PMQ后0,3,6,12,24,48小時(shí)各時(shí)

2、間點(diǎn)脂聯(lián)素表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：PMQ上調(diào)成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)，此作用呈明顯的濃度和時(shí)間依賴性。
　　第二部分 PMQ上調(diào)脂聯(lián)素表達(dá)的機(jī)制研究
　　目的：研究PMQ增強(qiáng)脂聯(lián)素表達(dá)的分子機(jī)制.
　　方法：3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成熟后，給予不同濃度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小時(shí)。分別檢測各組脂肪細(xì)胞PPARγ、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水

3、平；TNF-α和IL-6的分泌水平；AKT的磷酸化水平。觀察PPARγ拮抗劑GW9662（10μM）和PI3K抑制劑wortmannin（100 nM）對PMQ上調(diào)脂聯(lián)素表達(dá)作用的影響。
　　結(jié)果：①PMQ濃度依賴性促進(jìn)PPARγmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。②PMQ對總AKT無明顯影響，但濃度依賴性促進(jìn)磷酸化AKT的表達(dá)。③GW9662和wortmannin本身對脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素的表達(dá)無明顯影響，但能明顯拮抗PMQ增強(qiáng)adiponecti

4、n mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的作用。④PMQ濃度依賴性降低TNF-α和IL-6 mRNA表達(dá)和分泌.
　　結(jié)論：PMQ同過增強(qiáng)PPARγ和磷酸化AKT，降低TNF-α和IL-6的表達(dá)及分泌增強(qiáng)脂聯(lián)素的表達(dá)。
　　第三部分 PMQ對分化過程中脂肪細(xì)胞PPARs和脂肪細(xì)胞因子表達(dá)的影響
　　目的：脂肪細(xì)胞的年更新率約為20％，即每一瞬間都有相當(dāng)比例的細(xì)胞處在分化過程中，本實(shí)驗(yàn)研究PMQ對分化過程中脂肪細(xì)胞PPARs和脂肪細(xì)胞因

5、子表達(dá)的影響。
　　方法：對3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，全程給予PMQ（6天）。分化的第六天提取總RNA和總蛋白，分別檢測PPARs和脂肪細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平、PPARγ和脂聯(lián)素蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①PMQ明顯促進(jìn)PPARα，PPARβ和PPARγ的mRNA表達(dá)水平和PPARγ蛋白質(zhì)表達(dá)；②PMQ明顯促進(jìn)脂聯(lián)素的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)；③PMQ明顯降低TNF-α和IL-6 mRNA表達(dá)水平；PMQ對FGF-

6、21表達(dá)無明顯影響。
　　結(jié)論：PMQ促進(jìn)分化過程中脂肪細(xì)胞PPARs表達(dá)，促進(jìn)脂聯(lián)素mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)，抑制IL-6及TNF-αmRNA表達(dá)，對FGF-21表達(dá)無明顯影響。
　　第四部分5-PBDMA對分化過程中脂肪細(xì)胞PPARs和脂肪細(xì)胞因子表達(dá)的影響
　　目的：研究5-苯氧丁基二甲基芹菜素（5-BPDMA）對分化過程中脂肪細(xì)胞PPARs和脂肪細(xì)胞因子表達(dá)的影響。
　　方法：對3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)

7、分化，全程給予5-PBDMA（6天）。分化的第六天提取總RNA，檢測PPARs和脂肪細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①5BP-DMA對分化過程中脂肪細(xì)胞PPARs家族的mRNA表達(dá)無明顯影響；②低濃度的5-PBDMA（0.1,0.3μM）明顯促進(jìn)脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素mRNA表達(dá)，較高濃度5-PBDMA（3,10μM）抑制脂聯(lián)素mRNA表達(dá)；③5-PBDMA明顯抑制IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)水平，對FGF-21表達(dá)無明顯影響。