Chemerin在3T3-L1脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)改變及其與脂聯(lián)素、瘦素等關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的:1.觀察chemerin及其受體chemerinR基因在小鼠各臟器中的表達(dá)情況；探討3T3-L1脂肪細(xì)胞分化成熟過(guò)程中chemerin及其受體基因表達(dá)的變化。2.探討PPAR-Y激動(dòng)劑--羅格列酮對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞chemerin及其受體基因表達(dá)的影響。3.重組chemerin蛋白對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響并觀察其對(duì)脂聯(lián)素、瘦素和PPAR-γ2等基因表達(dá)的影響。
　　 方法:1.提取正常小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟

2、、腎臟、心臟、骨骼肌等臟器組織中總RNA,采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)其中chemerin及chemerinR基因表達(dá)水平；體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)分化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)誘導(dǎo)分化過(guò)程中不同天數(shù)(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因的表達(dá)變化。2.3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化至第10天為正常對(duì)照組；另一組在誘導(dǎo)分化過(guò)程中用10μM羅格列酮干預(yù)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)不同天數(shù)(0、2、

3、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因表達(dá)情況。3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后,分別以不同濃度梯度(0、0.1μM、1μM、10μM)的羅格列酮干預(yù)24小時(shí)后收集細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)chemerin和chemerinR基因的表達(dá)情況。3.3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化至第10天為正常對(duì)照組；一組誘導(dǎo)分化過(guò)程中用羅格列酮干預(yù)；另一組予以chemerin蛋白干預(yù)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)第10天PPAR-γ2、

4、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因表達(dá)情況。3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后,分別以不同濃度梯度(0、2.5ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml)的chemerin蛋白作用24小時(shí)后收集細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1、chemerin及其受體基因在小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟、腎臟、心臟、骨骼肌中均有

5、表達(dá)； chemerin及chemerinR基因低表達(dá)于3T3-L1前體脂肪細(xì)胞中,并隨前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟表達(dá)水平呈逐漸上調(diào)趨勢(shì)(P<0.05)。2、與對(duì)照組相比羅格列酮組對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中及成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞chemerin和chemerinR基因均起上調(diào)作用(P<0.05)。3、與對(duì)照組相比在3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中第10天羅格列酮干預(yù)組、chemerin蛋白組均上調(diào)PPAR-γ2、C/EBP

6、a、adiporlectin、leptin基因的表達(dá)(p<0.05)。3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后,與對(duì)照組相比chemerin蛋白組上調(diào)了PPAR-γ2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表達(dá)(p<0.05)。
　　 結(jié)論:1.chemerin及其受體基因在小鼠脂肪組織中均有表達(dá)；在3T3-L1脂肪前體細(xì)胞分化過(guò)程中,chemerin及其受體基因表達(dá)逐漸上調(diào)。2.PPAR-γ激動(dòng)劑-羅格列酮上調(diào)chem