中藥柴胡主要活性成分柴胡皂苷D作用于肝細(xì)胞LO2的肝損傷機(jī)理研究.pdf

1、[目的]
　　近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)中藥柴胡及其主要有效成分所引起的肝損傷報(bào)道日益增多。其導(dǎo)致肝臟毒性的機(jī)制尚不明確，為此，本課題以中藥柴胡中主要活性成分柴胡皂苷D(SSD)為代表，利用分子生物學(xué)技術(shù)探究其致肝細(xì)胞線粒體損傷作為中藥誘發(fā)肝毒性的分子機(jī)理，可以為防治中藥肝毒性提供潛在的干預(yù)分子靶點(diǎn)，具有理論與現(xiàn)實(shí)意義。
　　[研究方法]
　　本課題采用LO2肝細(xì)胞系進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)研究，以及小鼠灌胃SSD，應(yīng)用MTS、HE染色、T

2、UNEL染色、LDH檢測(cè)、Hoechst染色、流式細(xì)胞技術(shù)、免疫熒光、Western blotting、干擾RNA等實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。觀察:1）SSD小鼠灌胃后誘導(dǎo)肝損傷的作用。2）SSD體外作用LO2細(xì)胞后對(duì)對(duì)細(xì)胞線粒體的損傷作用以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2/Bax、caspase-3/c-caspase-3、caspase-8/c-caspase-8、c-caspase-9等的表達(dá)變化情況。3）SSD對(duì)PDGF-βR/p38 MAPK

3、信號(hào)通路的影響，以及SSD在阻斷PDGF-βR/p38信號(hào)通路后與下游凋亡通路之間的關(guān)系。4）SSD對(duì)fas介導(dǎo)的外源性凋亡信號(hào)通路的影響。
　　[結(jié)果]
　　實(shí)驗(yàn)證明SSD灌胃300mg/kg劑量能在小鼠體內(nèi)誘發(fā)明顯的肝臟損傷，促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡，同時(shí)SSD在體外能造成LO2細(xì)胞線粒體的損傷，抑制細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)，而促進(jìn)Bax和Caspase3/8/9的活化，Cytochrome C釋放增加，且呈劑量依賴(lài)性關(guān)系。進(jìn)一步研究

4、證明SSD通過(guò)抑制PDGF-βR/p38 MAPK信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程。除此之外SSD明顯影響細(xì)胞上fas和bid的表達(dá)，使fas表達(dá)增高而bid表達(dá)降低，表明SSD同樣激活fas外源性凋亡通路，并促使其將凋亡信號(hào)傳遞至線粒體。
　　[結(jié)論]
　　SSD通過(guò)抑制肝細(xì)胞中的PDGF-βR/p38 MAPK信號(hào)通路，造成線粒體損傷誘發(fā)下游凋亡通路的激活，進(jìn)而誘導(dǎo)LO2的凋亡產(chǎn)生;同時(shí)SSD能激活細(xì)胞膜上的fas受體，使cas