PARP-1在前列腺癌中表達(dá)的意義及其在前列腺癌PC3細(xì)胞株增殖中的作用研究.pdf

1、目的:
　　探討中國人群中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）及其活性產(chǎn)物聚腺苷二磷酸核糖（PAR）在前列腺癌及良性前列腺增生組織中的表達(dá)及意義；研究PARP-l特異性小分子干擾RNA(siRNA)對雄激素非依賴性前列腺癌PC3細(xì)胞株增殖的影響及其作用機(jī)制，為前列腺癌的治療提供一個新的思路。
　　方法:
　　應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測并比較PARP-1和PAR在78例前列腺癌和49例前列腺增生組織中的表達(dá)，分析

2、其在前列腺癌中與血清TPSA(TPSA＞20及TPSA≤20)的關(guān)系，及其在高分化前列腺癌（Gleason評分≤6分）和低分化前列腺癌（Gleason評分≥8分）組織中的表達(dá)差異。同時，設(shè)計合成3條PARP-l特異性siRNA序列，進(jìn)行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后，通過RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡法檢測其對PARP-l的干擾效果，篩選出最佳干擾效果的2條siRNA序列；通過單溶液細(xì)胞增殖檢測法檢測干擾PC3細(xì)胞內(nèi)源性PARP-l表達(dá)對細(xì)胞增殖的影響，并檢測

3、細(xì)胞內(nèi)Akt及其下游GSK3β活化水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1、PARP-1及PAR主要表達(dá)于前列腺癌及前列腺增生組織中細(xì)胞核中，幾乎不在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。PARP-1及PAR在前列腺癌組織中表達(dá)的陽性率及強(qiáng)陽性率均顯著高于前列腺增生組織（P＜0.05）。
　　2、盡管PARP-1或PAR在前列腺癌患者PSA＞20ng/ml組中的陽性及強(qiáng)陽性表達(dá)高于PSA≤20ng/ml組，但并無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。同樣，PA

4、RP-1或PAR在前列腺癌患者Gleason評分≥8組中的陽性及強(qiáng)陽性表達(dá)高于Gleason評分≤6組，但亦并無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3、PARP-1特異性干擾序列siRNA-1706、siRNA-2003和siRNA-2907均可以明顯抑制PARP-l mRNA和蛋白的表達(dá)(P<0．05)。其中siRNA-1706的干擾效果最好，siRNA-2907的干擾效果最弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。
　　4、轉(zhuǎn)

5、染PARP-1的siRNA-1706和siRNA-2003均可以明顯抑制PC3細(xì)胞增殖，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．01)。
　　5、轉(zhuǎn)染PARP-1的siRNA-1706和siRNA-2003在明顯抑制PARP-l表達(dá)的同時，也明顯抑制Akt(Ser473位點)及其下游 GSK3β(Ser9位點)的磷酸化，但對總Akt1和GSK3β的表達(dá)并無明顯影響。
　　結(jié)論:
　　1、PARP-1及其活性產(chǎn)物PAR在前列腺癌組織

6、中的表達(dá)較良性前列腺增生組織中明顯增高，表明其可能在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
　　2、PARP-1及PAR與前列腺癌患者血清TPSA及Gleason評分無明顯相關(guān)性，但有隨著TPSA及Gleason評分增高而表達(dá)增高的趨勢，表明其可能作為前列腺癌進(jìn)展的標(biāo)志物，但仍需進(jìn)一步驗證。
　　3、PARP-l特異性siRNA可以明顯干擾PC3細(xì)胞內(nèi)源性PARP-l的表達(dá)并抑制細(xì)胞增殖，該抑制作用與Akt的活化抑制以及其下游GSK