糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞脂向分化能力及EGb761干預(yù)效應(yīng).pdf

1、本文從以下幾個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分 糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞脂向分化能力
　　目的:體外誘導(dǎo)db/db鼠和db/m鼠的BMSCs向成脂細(xì)胞分化，比較其脂向分化能力有無差異。
　　方法:取8w齡db/db鼠和db/m鼠的BMSCs，通過流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)記物，CCK-8法檢測(cè)比較兩種小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力的差異，成脂誘導(dǎo)21d后行油紅O染色;應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)PPARγ、C/EBPα的基因表

2、達(dá);通過WesternBlot檢測(cè)成脂細(xì)胞相關(guān)因子PPARγ、C/EBPα蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:1.兩種小鼠的BMSCs均高度表達(dá)CD29、CD44，而低表達(dá)CD34、CD45(db/m鼠BMSCs陽性率分別為99.5％、99.1％、2.7％和2.8％，db/db鼠BMSCs陽性率分別為94.6％、97.4％、3.1％和4.1％);2.db/db鼠BMSCs增殖能力稍低于對(duì)照組db/m鼠(P＞0.05);3.油紅O染色示db/d

3、b組骨脂肪滴數(shù)量明顯多于db/m組，且脂肪滴的體積亦大于db/m組;4.RT-PCR檢測(cè)顯示成脂誘導(dǎo)21d，db/db組PPARγ和C/EBPα基因表達(dá)量均明顯高于db/m組(P＜0.05);5.Western Blot檢測(cè)顯示成脂誘導(dǎo)21d，db/db組PPARγ和C/EBPα蛋白表達(dá)量均明顯高于db/m組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.db/db鼠和db/m鼠的p3 BMSCs的活力強(qiáng)、純度高，增殖能力無明顯差異;2.db/

4、db鼠BMSCs脂向分化能力明顯強(qiáng)于db/m鼠。
　　第二部分 EGb761對(duì)糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的影響
　　目的:db/db鼠BMSCs成骨誘導(dǎo)分化的過程中加入EGb761進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)BMSCs骨向分化能力的影響。
　　方法:取8w齡db/db鼠的BMSCs，CCK-8法篩選EGb761對(duì)db/db鼠BMSCs的細(xì)胞毒性，選取最佳濃度干預(yù)db/db鼠BMSCs成骨分化，第14d行茜素紅染色，測(cè)

5、定ALP活性，RT-PCR檢測(cè)ALP、RUNX2基因的表達(dá)，Western Blot檢測(cè)ALP、RUNX2蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.濃度在1000 mg/L以下的EGb761對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增值無明顯細(xì)胞毒作用，選取最佳刺激濃度10mg/L;2.茜素紅染色示:EGb761干預(yù)組與誘導(dǎo)組相比礦化結(jié)節(jié)較大，數(shù)量較多，染色較深，呈現(xiàn)為紅褐色;EGb761干預(yù)組ALP活性強(qiáng)于誘導(dǎo)組(P＜0.05);3.與正常成骨誘導(dǎo)組相比，EGb761

6、干預(yù)組ALP和RUNX2基因表達(dá)量均明顯增強(qiáng)(P＜0.05);4.與正常成骨誘導(dǎo)組相比，EGb761干預(yù)組ALP和RUNX2蛋白表達(dá)水平均明顯上升（P＜0.05）。
　　結(jié)論:EGb761可促進(jìn)db/db小鼠BMSCs向成骨細(xì)胞分化。
　　第三部分 EGb761對(duì)糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化能力的影響
　　目的:db/db鼠BMSCs成脂分化的過程中加入EGb761進(jìn)行干預(yù)，觀察BMSCs脂向分化能力是否減弱，初

7、探EGb761對(duì)BMSCs脂向分化的影響及可能機(jī)制。
　　方法:取8w齡db/db鼠BMSCs，成脂分化過程中予EGb761進(jìn)行干預(yù)，21d后行油紅O染色，RT-PCR檢測(cè)PPARγ、C/EBPα和β-catenin的基因表達(dá)，Western Blot檢測(cè)PPARγ、C/EBPα和β-catenin的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:1.油紅O染色示EGb761干預(yù)組脂肪滴數(shù)量明顯少于正常誘導(dǎo)組，且脂肪滴的體積亦小于正常誘導(dǎo)組;2.RT

8、-PCR檢測(cè)顯示成脂誘導(dǎo)21d，EGb761干預(yù)組PPARγ和C/EBPα基因表達(dá)量均明顯低于正常誘導(dǎo)組(P＜0.05)，而β-catenin的基因表達(dá)量明顯高于正常誘導(dǎo)組(P＜0.05);3.Western Blot檢測(cè)顯示EGb761干預(yù)組PPARγ和C/EBPα蛋白表達(dá)量均明顯低于正常誘導(dǎo)組(P＜0.05)，而β-catenin的蛋白表達(dá)量明顯高于正常誘導(dǎo)組(P＜0.05)。
　　結(jié)論: EGb761可抑制db/db鼠BMS