蒙藥蓽茇寧的光譜分析方法及其與牛血清白蛋白相互作用的研究.pdf

1、蓽茇寧(Piperlonguminine，GBN)是蒙藥蓽茇的降血脂活性成分，為胡椒堿類衍生物，迄今尚無(wú)有效測(cè)定生物樣品中GBN的方法。本研究工作以GBN為研究對(duì)象，建立了能夠準(zhǔn)確檢測(cè)生物樣品中GBN的新方法，并采用熒光光譜法、紫外吸收光譜法研究了GBN與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。這一工作對(duì)理解GBN在生物體內(nèi)的代謝過(guò)程以及闡明GBN在體內(nèi)的藥理作用具有重要的理論意義。
　　首先將稀土配合物偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)作為光譜探針

2、，在酸性條件下，以偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)與GBN形成組成比為1∶1∶2配合物為基礎(chǔ)，研究了GBN與偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)作用的紫外-可見(jiàn)吸收光譜、共振瑞利散射光譜，分別建立了褪色分光光度法、共振瑞利散射法測(cè)定生物樣品中GBN的新方法。方法的線性范圍分別為0.02733～0.5466μg/mL、0.02733～5.466μg/mL，檢出限為0.02206μg/mL、0.00859μg/mL。利用該體系對(duì)生物樣品中的GBN進(jìn)行測(cè)定，并與已有測(cè)定

3、GBN的方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在靈敏度、抗干擾性等方面均有提高。還根據(jù)GBN具有熒光特性且熒光強(qiáng)度可被表面活性劑吐溫-20增敏的特性，建立了膠束增敏熒光法測(cè)定GBN，線性范圍為0.02733～8.199μg/mL，檢出限為0.001690μg/mL，可用于生物樣品經(jīng)適當(dāng)分離后GBN的測(cè)定。在此基礎(chǔ)上，采用同步熒光技術(shù)消除生物樣品的背景熒光對(duì)GBN熒光光譜的干擾，建立了直接測(cè)定血清中GBN含量的新方法，線性范圍為0.005466～3.2796

4、μg/mL，檢出限為0.001197μg/mL，可快速進(jìn)行大鼠血清中GBN含量的直接熒光測(cè)定。擬定的熒光方法靈敏度高、選擇性好，實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果令人滿意。
　　在GBN與蛋白質(zhì)相互作用方面，采用紫外-可見(jiàn)吸收光譜法和熒光光譜法，在模擬生理環(huán)境條件下，分別研究了胡椒堿(Piperine，PP)、姜黃素(Curcumin，Cur)與GBN之間的相互作用，探討其對(duì)GBN與BSA作用的影響。結(jié)果表明，GBN、PP、Cur與BSA的相互作用

5、過(guò)程均屬于靜態(tài)猝滅，結(jié)合常數(shù)Ka(BSA-GBN)＜Ka(BSA-PP)、Ka(BSA-GBN)＞Ka(BSA-Cur);計(jì)算不同溫度下的結(jié)合參數(shù)、作用距離及相應(yīng)熱力學(xué)參數(shù)，推斷其作用力類型分別為靜電作用、疏水作用、疏水作用;標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)顯示，與BSA的作用位點(diǎn)為siteⅠ、siteⅡ、siteⅡ;紫外吸收光譜、同步熒光光譜顯示GBN、PP、Cur改變了色氨酸殘基周圍的環(huán)境，對(duì)BSA構(gòu)象產(chǎn)生了影響。多元配體的協(xié)同性作用分析表明，GBN、