大鼠脊髓缺血后延遲性癱瘓模型的建立及發(fā)生機(jī)制初探.pdf

1、目的:
　　1.模仿胸主動脈瘤、胸腹主動脈瘤修復(fù)術(shù)對脊髓血供的影響，建立一個貼近臨床實際工作、操作較為簡單、可重復(fù)性較高、延遲性癱瘓發(fā)生率較高、實驗動物死亡率較低、存活時間較長的大鼠脊髓缺血后延遲性癱瘓的動物模型，探討導(dǎo)致延遲性癱瘓的主要危險因素。
　　2.觀察延遲性癱瘓大鼠脊髓的病理改變，探討脊髓缺血后延遲性癱瘓可能的發(fā)生機(jī)制。
　　3.依據(jù)本研究提出的脊髓缺血后延遲性癱瘓可能的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)行治療，觀察治療效果，并對

2、本研究關(guān)于脊髓缺血后延遲性癱瘓發(fā)病機(jī)制的假說加以驗證。
　　方法:
　　1.選取SD大鼠為實驗動物，模擬胸、胸腹主動脈瘤修復(fù)術(shù)，開胸后在左鎖骨下動脈與降主動脈交匯處以無創(chuàng)血管夾阻斷降主動脈，造成腰段脊髓缺血。按照阻斷降主動脈時體溫和不同的阻斷時間，將大鼠分組。觀察各組大鼠延遲性癱瘓發(fā)生率、生存率、生存時間;觀察降主動脈阻斷時間、阻斷時大鼠的體溫對延遲性癱瘓的影響。
　　2.選擇在33.0±0.5攝氏度下阻斷降主動脈40

3、min的大鼠與假手術(shù)組大鼠為研究對象。觀察解除降主動脈阻斷后6小時、30小時、48小時，大鼠腰膨大段脊髓Nissl染色、免疫熒光雙標(biāo)、REAL-TIMEPCR檢測結(jié)果。
　　3.選擇在33.0±0.5攝氏度下阻斷降主動脈40min大鼠和假手術(shù)組大鼠為實驗對象。接受降主動脈阻斷的大鼠，按照是否使用小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素及米諾環(huán)素的不同劑量，分為生理鹽水組、米諾環(huán)素30mg/kg組、米諾環(huán)素90mg/kg組。觀察各組大鼠術(shù)后各時間點

4、BBB評分、大鼠的生存率與存活時間。
　　研究結(jié)果:
　　1.在接受降主動脈阻斷的各組大鼠中，在33.0±0.5攝氏度下阻斷降主動脈40min組大鼠，其延遲性癱瘓發(fā)生率較高(73％);死亡率不隨延遲性癱瘓發(fā)生率升高而升高。在低溫下、常溫下均存在一個導(dǎo)致術(shù)后發(fā)生延遲性癱瘓的阻斷降主動脈時間窗。常溫下的時間窗為10-11.5min，低溫下的時間窗為18-40min。
　　2.大鼠在33.0±0.5攝氏度下接受降主動脈阻斷4

5、0min后，觀察腰膨大段脊髓病理改變。Nissl染色顯示，在解除阻斷后6小時，與假手術(shù)組比較，腰膨大段脊髓前角運動神經(jīng)元并無明顯減少，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05;而在解除阻斷后30小時，出現(xiàn)運動神經(jīng)元數(shù)目減少，與假手術(shù)組其差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05;在解除阻斷后48小時，運動神經(jīng)元數(shù)目進(jìn)一步減少，可見大片運動神經(jīng)元壞死后的空泡，運動神經(jīng)元數(shù)目少于假手術(shù)組與解除阻斷后30小時組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。免疫熒光雙標(biāo)顯示

6、，Iba1、IL-1β、IL-6，在解除阻斷后6小時，與假手術(shù)組比較，其灰度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05;而在解除阻斷后30小時，與假手術(shù)組比較，其灰度值均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05; IL-1β與Iba1、IL-6與Iba1共表達(dá)。REAL-TIME PCR檢測顯示，在解除阻斷后30小時，IL-1β與IL-6mRNA的表達(dá)均高于假手術(shù)組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。
　　3.在解除降主動脈阻斷后1小時，予以米

7、諾環(huán)素90mg/kg組大鼠，其術(shù)后30、36、48、60、72小時下肢運動功能的BBB評分高于予以生理鹽水組大鼠，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05;而予以米諾環(huán)素30mg/kg組大鼠，在術(shù)后30、36、48、60、72小時BBB評分與生理鹽水組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05。各組大鼠術(shù)后生存率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05。
　　實驗結(jié)論:
　　1.在33.0±0.5攝氏度下阻斷SD大鼠降主動脈40min，可以建立一個延遲性

8、癱瘓發(fā)生率較高、實驗動物死亡率較低、生存時間較長、與臨床胸、胸腹主動脈瘤修復(fù)術(shù)較為接近的脊髓缺血后延遲性癱瘓動物模型。降主動脈阻斷時間與阻斷時溫度是決定大鼠術(shù)后是否會發(fā)生延遲性癱瘓的兩個重要因素。低溫與常溫下均存在一個導(dǎo)致延遲性癱瘓發(fā)生的時間窗，當(dāng)降主動脈阻斷時間位于時間窗內(nèi)時，部分大鼠術(shù)后會發(fā)生延遲性癱瘓;阻斷時間越接近時間窗上限，延遲性癱瘓發(fā)生率越高;低溫可以提高這一時間窗的下限，擴(kuò)大這一時間窗的窗口期。
　　2.復(fù)溫后小膠質(zhì)