大鼠肝腎纖維化復(fù)合動(dòng)物模型的建立及機(jī)制初探.pdf

1、目的:
　　動(dòng)物模型是醫(yī)藥科學(xué)領(lǐng)域最重要的研究工具之一，這是因?yàn)榻⒛M特定狀態(tài)的模型對(duì)于特定病癥的研究具有重要意義。雖然慢性肝病(CLD)與腎病之間的聯(lián)系已被證實(shí)，且二者常呈現(xiàn)器官纖維化，但是尚缺乏用于研究疾病發(fā)展規(guī)律的肝腎纖維化復(fù)合動(dòng)物模型。因此，此次實(shí)驗(yàn)?zāi)康木褪且源笫鬄閷?shí)驗(yàn)對(duì)象建立一個(gè)廉價(jià)、省時(shí)、可復(fù)制的肝腎纖維化模型，并對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法:
　　在此實(shí)驗(yàn)中，將25只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分成四

2、組，其中模型組10只，牛血清白蛋白組、四氯化碳組和對(duì)照組各5只。模型組動(dòng)物腹腔注射濃度為30％的四氯化碳油溶液，每周兩次，連續(xù)10周;同時(shí)腹腔注射1克牛血清白蛋白溶液，每天一次，連續(xù)8周，第9周和第10周各注射5次。牛血清白蛋白組、四氯化碳組分別注射牛血清白蛋白和四氯化碳，方法和劑量同模型組。對(duì)照組不作處理。每?jī)芍芊Q一次動(dòng)物體重，并記相關(guān)數(shù)據(jù)。在實(shí)驗(yàn)?zāi)?，用代謝籠收集24小時(shí)尿液并檢測(cè)其中總蛋白質(zhì)含量;采血進(jìn)行肝腎功能相關(guān)的生化指標(biāo)檢測(cè);

3、處死所有動(dòng)物后，取肝臟和腎臟組織，進(jìn)行固定或冷凍。制作石蠟切片，蘇木精-伊紅染色，觀察病理形態(tài)改變，天狼猩紅染色觀察纖維化程度，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)免疫組織化學(xué)染色了解肌纖維母細(xì)胞數(shù)量;制作冰凍切片，免疫熒光法檢測(cè)腎組織lgG、IgM、IgA、C3、C1q沉積情況;電子顯微鏡觀察腎組織超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果:
　?、俑鹘M動(dòng)物體重均增加。其中體重增加最多的是牛血清白蛋白組，增加最少的是四氯化碳組。
　?、贖E染

4、色結(jié)合天狼猩紅染色，光鏡檢查發(fā)現(xiàn):與其他組相比較，四氯化碳組的肝臟顯示嚴(yán)重纖維化，但其腎纖維化不明顯;模型組肝纖維化程度顯著遜于四氯化碳組，但腎臟可見(jiàn)局灶性間質(zhì)性炎癥和結(jié)締組織增生;牛血清白蛋白組和對(duì)照組無(wú)肝纖維化，前者腎臟病變與模型組相似。
　?、勖庖呓M織化學(xué)染色顯示，四氯化碳組、模型組肝臟內(nèi)α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞顯著增加，但前者較后者更多;在4組中，僅模型組可見(jiàn)腎臟內(nèi)部分細(xì)胞α-SMA陽(yáng)性。
　?、苊庖邿晒鈾z測(cè)顯示，模型組I

5、gG和IgM沿腎小球毛細(xì)血管壁分布為主，呈現(xiàn)中等強(qiáng)度顆粒狀熒光;牛血清白蛋白組和四氯化碳組僅IgM陽(yáng)性，但前者主要沿腎小球毛細(xì)血管壁分布，后者主要分布于系膜區(qū)。
　?、蓦婄R觀察顯示，在模型組腎小球中，毛細(xì)血管基底膜均質(zhì)狀增厚，失去3層結(jié)構(gòu);上皮下纖維樣電子致密物呈串珠狀沉積;足細(xì)胞腫脹，線粒體嵴變短;腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)易見(jiàn)老化線粒體;牛血清白蛋白組超微結(jié)構(gòu)改變與模型組差別在于電子致密物偶見(jiàn)于內(nèi)皮側(cè)和基底膜內(nèi)，上皮下未見(jiàn)電子致密物沉積

6、。其余兩組因制樣失敗未能觀察超微結(jié)構(gòu)改變。
　?、扪迳瘷z查顯示，四氯化碳組肝臟受損的生化參數(shù)最高，牛血清蛋白組最低。
　?、吣蛞簷z查:模型組24小時(shí)尿量和尿蛋白量在各組中最高。
　　結(jié)論:
　?、俾?lián)用四氯化碳和牛血清白蛋白初步建立了肝腎纖維化復(fù)合動(dòng)物模型。
　?、诟卫w維化的病理改變較重;腎纖維化病理改變輕，尚處于疾病的早期階段。
　?、叟Ｑ灏椎鞍讓?duì)四氯化碳性肝損傷有一定拮抗作用，在后續(xù)的造模探索