延腎口服液抑制UUO模型大鼠腎間質纖維化的機制探討.pdf

1、目的：腎臟疾病以炎癥細胞浸潤及纖維化為主要特征，而腎臟間質纖維化被認為是導致終末期腎功能衰竭的最終途徑，其間伴有腎小球系膜細胞和成纖維細胞活化、炎癥細胞浸潤、細胞凋亡以及基底膜擴張等，但根本原因還是炎癥反應的發(fā)展。而作為炎癥細胞中重要成員的肥大細胞（mast cell，MC）可能通過多種途徑在腎間質纖維化中起著不可忽視的作用。目前中藥抑制腎間質纖維化作用機制研究中尚未開展對肥大細胞作用的相關研究。研究評價延腎口服液（YSH）抑制肥大細胞

2、脫顆粒對腎間質纖維化的療效，有可能從肥大細胞環(huán)節(jié)為腎纖維化的防治提供一條新的途徑，為臨床開發(fā)預防和治療腎間質纖維化提供實驗依據(jù)。本實驗研究自組中藥復方YSH抑制UUO模型大鼠腎間質纖維化作用，并從肥大細胞角度探討YSH對腎間質纖維化抑制作用的可能機制。
　　 方法：
　　 （1）研究模型及動物分組：采用大鼠單側輸尿管梗阻（unilateral ureteric obstruction，UUO）模型作為腎間質纖維化研究模型

3、。隨機選取75只健康雄性SD大鼠作為研究樣本，體重150±20g，分為以下5組（每組15只）：UUO組（模型對照）；手術對照組（假手術組/Sham組）；UUO+貝那普利（陽性對照）組；UUO+低劑量YSH治療組；UUO+高劑量YSH治療組。在無菌條件下行左側輸尿管結扎術。手術對照組開腹后，分離出左側輸尿管，但不結扎，其余步驟相同。術前1日開始給藥，UUO組、手術對照組給予2.1ml/d生理鹽水灌胃，每日一次，貝那普利組給予2.5ml/d

4、，YSH高、低劑量治療組分別給予2.1ml/d、1.05ml/d灌胃，于手術后六周（第42天）收集標本。
　　 （2）病理學檢測及評價：取梗阻側腎組織行HE染色觀察腎間質病理學變化，采用Banff標準評定腎間質纖維化程度。
　　 （3）纖維化腎組織中肥大細胞數(shù)量和分布特點研究：采用甲苯胺蘭染色和免疫組化方法檢測腎組織中類胰蛋白酶（Tryptase，肥大細胞膜表面特異表達）表達。
　　 （4）纖維化腎組織中肥大細胞

5、超微結構和脫顆粒狀態(tài)研究：借助透射電鏡下觀察纖維化腎組織中肥大細胞超微結構特點。
　　 （5）腎組織中轉化生長因子-β1（TGF-β1）及α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達水平檢測：采用免疫組化方法檢測纖維化腎組織TGF-β1和α-SMA的表達變化，并進行半定量病理圖像分析。
　　 （6）實驗大鼠腎功能檢測及24小時尿蛋白定量測定：留取血、尿標本做血肌酐（SCR）、尿肌酐（UCR）、血尿素氮（BUN）、尿尿素氮（UUN

6、）及24小時尿蛋白定量測定。
　　 （7）統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)資料采用（X±s）表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理。多組間均數(shù)經方差齊性檢驗后應用單因素方差分析。相關性采用PEARSON直線相關分析。
　　 結果：
　　 （1）實驗大鼠腎間質纖維化病理變化：UUO術后6周，各組大鼠表現(xiàn)不同程度的梗阻側腎臟腫大，腎實質變薄，腎盂腎盞擴大。光鏡下觀察手術對照組大鼠腎臟無明顯病理改變，UUO組顯示腎小管間質中炎癥細胞

7、增多，小管細胞呈現(xiàn)不同程度的變性、萎縮及壞死，小管周圍腎間質增寬，YSH高、低劑量治療組和貝那普利組表現(xiàn)部分腎小管輕度擴張，病變程度輕于UUO組，而各組腎小球均未見明顯病理變化。
　　 （2）肥大細胞形態(tài)學特點和超微結構特征：甲苯胺蘭染色和Tryptase染色結果顯示，肥大細胞主要分布在腎間質血管周圍，與UUO組相比，YSH高、低劑量治療組和貝那普利組大鼠肥大細胞數(shù)量顯著減少（P<0.05），透射電鏡觀察，UUO組脫顆粒的肥大細

8、胞形狀不規(guī)則，電子密度降低，著色不均勻，胞質中有空泡出現(xiàn)，膜表面微絨毛狀突起增多，失去完整胞膜結構，YSH高、低劑量組和貝那普利組與UUO組相比，肥大細胞體積較大，未見顆粒脫出。
　　 （3）腎組織TGF-β1、α-SMA表達水平：UUO組和各治療組TGF-β1、α-SMA表達均明顯增多，與手術對照組比較有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與UUO組相比，YSH高、低劑量治療組和貝那普利組腎間質TGF-β1、α-SMA表達水平顯著降低

9、（P<0.05）；YSH高劑量組與貝那普利組相比，差異無顯著性（P>0.05）。
　　 （4）BUN、UUN、SCR、UCR，及24小時尿蛋白定量結果：YSH高、低劑量治療組和貝那普利組與UUO組相比，BUN、UCR和UUN差異具有顯著性（P<0.01），YSH高劑量組與貝那普利組相比，差異無顯著性（P>0.05），SCR及24小時尿蛋白定量在各組間均無明顯差異（P>0.05）。
　　 結論：
　　 （1）YSH

10、抑制UUO模型大鼠腎間質纖維化的作用與貝納普利相似，并具有一定的改善UUO模型大鼠腎功能的作用；
　　 （2）研究表明UUO模型大鼠腎間質肥大細胞的浸潤、功能狀態(tài)與腎間質纖維化的嚴重程度有密切關系，而YSH可減少UUO模型大鼠腎間質肥大細胞的數(shù)量，超微病理顯示具有抑制其脫顆粒的作用；
　　 （3）YSH抑制UUO術后腎組織中TGF-β1、α-SMA表達，提示YSH可能通過肥大細胞-TGF-β1-Smad途徑發(fā)揮抗腎間質纖