正常人和腫瘤患者CIK細胞體外擴增能力及殺傷活性對比分析.pdf

1、癌癥對人類健康和生命的威脅很大。手術、化療、放療是治療惡性腫瘤的三大傳統(tǒng)療法，有著各自的缺點。過繼免疫治療法是將有免疫活性的自體的或同種異體的免疫細胞及或其產物輸給患者，為患者提供現(xiàn)成的免疫力，以達到治療目的。這種方法與其它抗腫瘤藥物相比，可以在沒有損傷機體的免疫系統(tǒng)結構和功能的前提下，直接殺傷腫瘤細胞，并且調節(jié)和增強機體的免疫功能。用于過繼免疫治療的活性細胞必須具有較強的細胞活性和增殖力，CIK細胞被認為是新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療

2、的首選方案。本實驗室對CIK細胞的研究有著豐富的經驗，到目前為止已成功地用CIK細胞治療了400多例的腫瘤患者，并有深入研究。本實驗觀察了不同年齡的正常人與腫瘤患者PBMC在體外經多種因子誘導后，其擴增能力和對腫瘤細胞株的殺傷力的差別，為臨床上應用CIK細胞治療腫瘤提供實驗依據。 材料與方法: 1、實驗材料 (1)臨床資料正常人外周血樣本10例，采自本單位男性健康志愿者，25～30歲：5例，50～60歲：5例；患

3、者外周血樣本33例，采自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院肺鱗癌男性患者(全部病理經2名病理醫(yī)師確診)，年齡41～75歲。 (2)腫瘤細胞株人乳腺癌細胞株(MDA-MB-231)、肺癌細胞株(BE-1)、前列腺癌細胞株(PC-3)。 (3)試劑 胎牛血清、胰蛋白酶、RPMI-1640培養(yǎng)基、MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒、人淋巴細胞分離液(Ficoll-Paque Plus)、抗CD<,3>單克隆抗體(MabCD<,3

4、>)、基因重組人白介素2(IL-2)、基因重組人白介素1α(IL-1α)、基因重組人干擾素γ(IFN-γ)。 (4)實驗設備倒置熒光顯微鏡、離心機、二氧化碳培養(yǎng)箱、超凈臺、電腦壓力蒸汽滅菌器. 2、實驗方法 (1)CIK細胞的制作用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC)，加入IFN-γ、IL-2、IL-1、CD3McAb誘導CIK細胞的生成。 (2)CIK細胞增殖的測定細胞記數(shù)板法計數(shù)細胞。

5、 (3)腫瘤細胞的培養(yǎng)含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)。 (4)MTT法測CIK細胞殺瘤活性培養(yǎng)14天的CIK細胞作為效應細胞，三種腫瘤細胞株作為靶細胞，以20∶1效靶比分別把效應細胞和靶細胞加入96孔板，另設靶細胞和單獨效應細胞組，每組設三個復孔，培養(yǎng)48小時后用MTT法測定殺傷活性，公式如下：殺傷活性(％)=[1-(實驗組OD值.單獨效應細胞OD值)/單獨靶細胞OD值]<'*>100％ (5)統(tǒng)計學處

6、理. 結果: 1、CIK細胞的增殖與正常人CIK細胞相比，腫瘤患者CIK細胞的增殖速度較慢，其最大增殖倍數(shù)也略低，同時發(fā)現(xiàn)CIK細胞的增殖速度與年齡有關，即年齡越小CIK細胞的擴增能力越強。 2、MTT法測定CIK細胞的殺傷活性 (1)正常人、腫瘤患者CIK細胞對3種腫瘤細胞株的抑瘤比較將培養(yǎng)14 d的CIK細胞以20∶1效靶比殺傷3種腫瘤細胞株(MDA-MB-231，BE-1，PC-3)，正常人的CIK

7、對三種腫瘤細胞株(MDA-MB-231，BE-1，PC-3)的殺傷率分別為75.80±10.1，74.2±8.5，81.3±9.6，明顯高于腫瘤患者。 (2)不同年齡段腫瘤患者CIK細胞對3種腫瘤細胞株的抑瘤比較將腫瘤患者按年齡段分組，50-60歲、60-70歲、>70歲組對三種腫瘤細胞株的殺傷率明顯低于<50歲組；50-60歲、60-70歲兩組之間殺傷率沒有顯著差別，但均明顯高于>70歲組，可以認為CIK細胞對腫瘤的殺傷力與年