恩蚜小蜂屬部分種類DNA條形碼的構(gòu)建及系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、恩蚜小蜂屬是蚜小蜂科中種類最多的一個屬，其大部分種類是粉虱和介殼蟲的寄生蜂，在害蟲生物防治中發(fā)揮重要作用。恩蚜小蜂屬個體較小，玻片標(biāo)本制作難度較大，利用傳統(tǒng)形態(tài)特征進行分類和系統(tǒng)發(fā)育分析變得較為困難。
　　DNA條形碼技術(shù)作為一項新興的物種鑒定技術(shù)，已受到廣泛關(guān)注。本論文應(yīng)用DNA條形碼技術(shù)對17種恩蚜小蜂進行了分子鑒定和系統(tǒng)發(fā)育研究，驗證了DNA條形碼用于恩蚜小蜂種類鑒定和系統(tǒng)發(fā)育研究的有效性。
　　首先對各地采集的恩蚜小

2、蜂種類進行形態(tài)分類及特征描述，并以黃蚜小蜂屬的代表種為外群，基于28SrDNA、COI及二者的合并數(shù)據(jù)集28SrDNA&COI，采取相鄰連接法、最小進化法、最大似然法構(gòu)建了恩蚜小蜂屬的系統(tǒng)發(fā)育樹。通過分析得出如下結(jié)果：
　　1.28SrDNA和COI兩個基因位點被應(yīng)用于17種恩蚜小蜂32個個體的序列分析及系統(tǒng)發(fā)育研究。由于部分個體不能用通用引物成功的擴增，本文設(shè)計出恩蚜小蜂屬28SrDNA和COI的特異性引物。由測序結(jié)果及 BLA

3、ST搜索結(jié)果顯示，28SrDNA和COI基因可以用來區(qū)分所研究的恩蚜小蜂種類，因此28SrDNA和COI基因是特異性良好的DNA條形碼標(biāo)記基因。
　　2.恩蚜小蜂屬28SrDNA序列的保守位點為3，占總位點數(shù)的0.55％；序列變異位點為538，占總變異位點的99.4%；簡約信息位點為536，占序列總位點的99.1%；A+T的堿基含量為43.5%，低于C+G的堿基含量(56.5%)。轉(zhuǎn)換數(shù)為113，顛換數(shù)為237，堿基的轉(zhuǎn)換主要發(fā)生

4、在TC間，轉(zhuǎn)換的頻率是顛換頻率的0.48倍，由此可以認(rèn)為恩蚜小蜂屬的28SrDNA的保守性較強。經(jīng)分析堿基替換飽和性和P距離-R的關(guān)系，可知28SrDNA序列的系統(tǒng)發(fā)育信號較強。
　　3.恩蚜小蜂屬COI序列的保守位點為1，占總位點數(shù)的0.15％；序列變異位點為680，占總變異位點的99.7％；簡約信息位點為678，占序列總位點的99.4％；A+T的堿基含量為77.2％，遠(yuǎn)高于C+G的堿基含量（22.8％）。其中轉(zhuǎn)換數(shù)為99，顛換

5、數(shù)為284，堿基的顛換主要發(fā)生在AT間，其轉(zhuǎn)換的頻率是顛換頻率的0.35倍，可見恩蚜小蜂屬的COI序列的變異率較高。經(jīng)分析堿基替換飽和性和P距離-R的關(guān)系，可以得出COI序列的系統(tǒng)發(fā)育信號也較好。
　　4.恩蚜小蜂屬28S&COI數(shù)據(jù)集的序列保守位點為9，占總位點數(shù)的0.65%；序列變異位點為1346，占總變異位點的96.6％；簡約信息位點為1262，占序列總位點的90.5％；A+T的堿基含量為56.1％，C+G的堿基含量為43.

6、9％。其中轉(zhuǎn)換數(shù)為152，顛換數(shù)為327，轉(zhuǎn)換的頻率是顛換頻率的0.46倍，堿基的轉(zhuǎn)換主要發(fā)生在TC間。與28SrDNA序列的堿基替換情況相似，且恩蚜小蜂屬28S&COI數(shù)據(jù)集的保守性也較強。
　　5.得出恩蚜小蜂屬4個確定的種團：aurantii種團（aurantii（lutea+（perniciosi+smithi））， strenua種團（sophia+（bimaculata+protransvena）），inaron種團（

7、inaron+（azimi）），luteola種團(luteola+meritoria)。
　　6.與COI基因相比，恩蚜小蜂屬28SrDNA在28SrDNA&COI合并數(shù)據(jù)集中起主要作用，因此認(rèn)為28S基因更能夠提供有效的系統(tǒng)發(fā)育信息。
　　7.運用特征法對DNA條形碼進行分析，且DNA條形碼在屬以下的鑒定水平上顯示出有效性。28SrDNA和COI基因序列均可對所研究的種類進行鑒定，且所有種類均在28SrDNA和COI基因