腫瘤細胞表面透明質酸在腫瘤淋巴轉移中的實驗研究.pdf

1、目的：研究在腫瘤淋巴轉移過程中腫瘤細胞與淋巴內皮細胞的粘附，是否是通過腫瘤細胞表面的透明質酸(HA)與淋巴內皮細胞表面的特異透明質酸受體(LYVE-1)的相互作用介導，探討腫瘤細胞表面HA對腫瘤淋巴轉移的生物學作用。
　　 方法：1.采用顆粒排除、免疫細胞熒光實驗鑒定轉移潛能不同的6株乳腺癌細胞表面HA的含量，通過流式細胞術檢測其表面HA受體-CD44的表達，探尋轉移潛能、HA含量以及CD44表達三者之間的相關性。2.克隆、構建

2、人淋巴管內皮細胞特異透明質酸受體-1(LYVE-1)的真核表達質粒，并將其轉染COS-7細胞，應用免疫細胞熒光、共聚焦顯微鏡檢測LYVE-1的表達定位，自制德克薩斯紅標記的HA鑒定LYVE-1的結合活性，建立LYVE-1體外活化細胞模型以替代淋巴內皮細胞。3。通過細胞粘附、平行板流動腔等實驗探究表面高HA乳腺癌細胞HS-578T、表面低HA乳腺癌細胞MCF-7分別與COS-7LYVE-1(+)、COS-7pEGFP-N1細胞之間的粘附差

3、異，用透明質酸酶消化HS-578T細胞表面HA前后的粘附實驗，驗證HA介導的腫瘤細胞粘附作用。4.建立人腎近曲小管上皮細胞(HK2)表面固定形成條索狀HA(HAcables)的模型，采用HK2細胞與COS-7LYVE-1(+)、COS-7pEGFP-N1細胞之間的粘附實驗探索HA cables是否作用于LYVE-1增強COS-7細胞的粘附。
　　 結果：1.轉移潛能不同的6株乳腺癌細胞表面HA的含量差異明顯。高轉移乳腺癌細胞HS

4、-578T、MDA-MB-231自身合成大量HA固定在細胞表面，且CD44表達很高；高轉移乳腺癌細胞MDA-MB-435S合成相對較少HA，但表面CD44表達很高；中轉移乳腺癌細胞MDA-MB-468表面HA含量很弱，也表達豐富的CD44；低轉移乳腺癌細胞SK-BR-3、MCF-7表面HA含量、CD44表達均很低。2.成功構建了人LYVE-1的真核表達質粒，經鑒定轉染COS-7細胞后，LXVE-1表達在該細胞膜上，且具有結合HA的生物學

5、功能。3.表面高HA的HS-578T乳腺癌細胞通過HA與淋巴內皮細胞特異透明質酸受體LYVE-1的相互作用，介導腫瘤細胞與COS-7LYVE-1(+)細胞的粘附，使腫瘤細胞與其的粘附高于COS-7pEGFP-N1細胞。經透明質酸酶預消化HS-578T乳腺癌細胞表面HA再進行粘附后，這種粘附差異降低。表面低HA的MCF-7乳腺癌細胞基本上不能通過LYVE-1與COS-7細胞的粘附出現(xiàn)差異。4.HA cables通過LYVE-1使HK2細胞