透明質(zhì)酸促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究透明質(zhì)酸(hyaluronan，HA)對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，探討CD44介導(dǎo)HA作用的機(jī)制。 方法：從SD大鼠腹膜腔分離巨噬細(xì)胞，用RPMI1640培養(yǎng)。用免疫熒光染色法標(biāo)記巨噬細(xì)胞的CD44，在熒光顯微鏡下觀察CD44在巨噬細(xì)胞的分布。在噬動軌跡實(shí)驗(yàn)，將巨噬細(xì)胞接種在預(yù)涂不同細(xì)胞外基質(zhì)和鋪有氯化金顆粒的蓋玻片上。細(xì)胞吞噬顆粒后，用圖像分析儀測量細(xì)胞周圍的無顆粒軌跡面積，并在掃描電鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。用CD44阻斷

2、抗體處理細(xì)胞后，觀察細(xì)胞吞噬氯化金顆粒的變化。在吞噬熒光微珠實(shí)驗(yàn)，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞吞噬的熒光微珠數(shù)。阻斷細(xì)胞表面的CD44后，觀察細(xì)胞吞噬熒光微珠的變化。用4％多聚甲醛固定細(xì)胞后，再用phallacidin標(biāo)記吞噬微珠細(xì)胞的F-肌動蛋白，共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察吞噬熒光微珠處細(xì)胞內(nèi)F-肌動蛋白的分布。在吞噬HA包被微珠實(shí)驗(yàn)，利用氨基與羧基之間的縮合反應(yīng)使HA結(jié)合于氨基化修飾的微珠表面。用SABC-FITC標(biāo)記微珠表面的HA。計(jì)