透明質(zhì)酸衍生物載姜黃素納米粒子的制備及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、近年來，從傳統(tǒng)中藥姜黃中提取的姜黃素（Curcumin，Cur）在癌癥治療領(lǐng)域受到越來越多的關(guān)注。姜黃素是一種多功能化的天然酚性物質(zhì)，研究者們通過對它的初步探討研究已經(jīng)判定姜黃素具有多種藥理作用，對乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌等癌癥有抑制作用，并且姜黃素藥源廣、價格低廉、產(chǎn)生的副作用少，因此在醫(yī)學上受到了很大推崇。另有實驗證明姜黃素具有輔助化學治療的功效，即，它可以打破癌細胞的防御系統(tǒng)，幫助化學藥物順利進入癌細胞。姜黃素與化學藥物一道，對前

2、列腺癌、膀胱癌、腸癌等腫瘤細胞株的聯(lián)合作用具有“一加一大于二”的加乘效果，遠優(yōu)于兩者單獨的抗癌作用。然而因為姜黃素存在不穩(wěn)定、溶解度低、生物利用度低、代謝率高等諸多缺點使其在臨床上的運用受到很大限制。該問題可以通過藥物制備技術(shù)與方法將姜黃素負載到納米載體上得到解決。
　　硫化氫（Hydrogen sulfide，H2S）被認為是繼一氧化碳（CO）和一氧化氮（NO）之后的第三種氣體信號分子，與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病都有著密切的關(guān)系，參與了

3、諸如神經(jīng)、泌尿、內(nèi)分泌、心血管、呼吸、消化、生殖系統(tǒng)以及感覺器官的功能調(diào)節(jié)過程并且對機體發(fā)揮重要作用，其生理學和病理生理學意義是現(xiàn)今學術(shù)界研究的熱點。近年來，人們先后發(fā)現(xiàn)或合成了一些新的硫化氫供體。這些藥物分子同時具備硫化氫的生物學作用和其母體藥物本身的療效，能夠在體內(nèi)環(huán)境緩慢地釋放硫化氫，達到優(yōu)于硫氫化鈉的效果。
　　在本研究中，我們利用水溶性透明質(zhì)酸（HA）作為藥物載體材料，通過化學反應制備姜黃素納米顆粒（HA-Cur）。同時

4、，我們還制備了一種新型的H2S供體前藥：HA-H2S供體耦合物，并進行了體外細胞研究，以測試HA-Cur、HA-H2S供體以及這兩種耦合物的混合物對癌細胞的抑制作用。我們的研究結(jié)果表明，每一種耦合物都可以抑制乳腺癌的生長，而聯(lián)合治療效果最好。
　　目的：合成HA-H2S供體，制備透明質(zhì)酸載姜黃素納米粒子（HA-Cur），并對其進行各項表征、體外釋藥評價及體外抗腫瘤活性研究，通過觀察 HA-H2S供體、HA-Cur及HA-H2S供體

5、與HA-Cur混合物對癌細胞株增殖的抑制情況，初步探討HA-H2S供體、HA-Cur及HA-H2S供體與HA-Cur混合物對癌細胞株的抗癌效果。
　　方法：
　　1.利用透明質(zhì)酸（HA）與己二酸二酰肼（ADH）反應合成己二酸二酰肼交聯(lián)透明質(zhì)酸（HA-ADH），以HA-ADH為水溶性載體材料與勞森試劑反應，制備水溶性緩釋H2S供體（HA-H2S），以透明質(zhì)酸（HA）為載體材料與姜黃素（Cur）反應，制備HA-Cur納米粒子，并

6、利用核磁共振氫譜（1H-NMR）、紅外光譜（IR）儀器對化合物的結(jié)構(gòu)進行表征。
　　2.通過激光粒度與Zeta電位分析儀考察所制備的載姜黃素納米粒子的平均粒徑、多分散系數(shù)（PDI）和Zeta電位，采用高效液相色譜法測定HA-Cur的載藥量，同時采用透析法考察其在PBS緩沖液（pH7.4，含0.5％的SDS）中的釋藥行為。
　　3.采用MTT比色法考察不同濃度的Cur原料藥、HA-H2S供體、HA-Cur及HA-Cur與HA-

7、H2S供體的混合物在體外對癌細胞的增殖抑制效果。
　　結(jié)果：
　　1.通過對紅外、核磁圖譜的解析發(fā)現(xiàn)，我們合成了HA-ADH、HA-H2S供體、HA-Cur耦合物，成功制備了HA-Cur納米粒子。其中HA-ADH的產(chǎn)率為61.0%，HA-H2S供體的產(chǎn)率為73.9%。
　　2.HA-Cur納米粒子的粒徑為268.5nm，載藥量為7.0%，96h的體外累積釋藥量為45.4%。
　　3.Cur原料藥、HA-H2S供體

8、、HA-Cur及HA-H2S供體與HA-Cur的混合物對MDA-MB-468乳腺癌細胞都有一定的抑制作用，其中HA-H2S供體與HA-Cur的混合物對MDA-MB-468乳腺癌細胞的抑制效果最好。
　　結(jié)論：我們成功合成了HA-ADH、HA-H2S供體、HA-Cur，所制備的透明質(zhì)酸-姜黃素和透明質(zhì)酸-硫化氫供體納米粒子粒度分布均勻，表面Zeta電位的絕對值較大，在溶液中具有較好的穩(wěn)定性。HA-H2S供體和 HA-Cur單獨給藥都