TritonX-100滲透化處理氧化微桿菌(Microbacterium oxydans CGMCC1788)轉(zhuǎn)化葛根素的研究.pdf

1、葛根素（puerarin，pue），4',7-二羥基-8-β-D-葡萄糖基異黃酮（8-C-β-D-Glucopyranosyl-7，4'-hydroxy-Isoflavone)目前在臨床上已被廣泛應(yīng)用于心腦血管系統(tǒng)疾病、糖尿病、眼底疾病、突發(fā)性耳聾、急性酒精中毒、擬菊酯類(lèi)農(nóng)藥中毒及腫瘤等疾病的治療。但存在如下缺點(diǎn)：1）體內(nèi)消除速率快，臨床使用劑量較大，口服生物利用度低；2）葛根素水溶解度低(6.24 g/L），注射制劑大多含有助溶劑以增

2、加制劑的穩(wěn)定性；助溶劑使不溶性雜質(zhì)增加，對(duì)人體產(chǎn)生一定的毒副作用，致使用藥安全性降低。為了改善葛根素的水溶性，進(jìn)而改善其藥理活性、提高其生物利用度。利用前藥、軟藥、電子等排等原理對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾改造，以改善其水溶性和脂溶性，改變其在體內(nèi)的脂水分布系數(shù)，提高其生物利用度及選擇性，最終增強(qiáng)其藥理活性，是今后對(duì)葛根素研究的重點(diǎn)。
　　 本實(shí)驗(yàn)室丁娟芳、蔣潔蓉等人篩選得到一株氧化微桿菌M. OxydansCGMCC 1788，通過(guò)該菌的

3、靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化可以將葛根素轉(zhuǎn)化為葛根素-7-O-葡萄糖苷。本文對(duì)氧化微桿菌細(xì)胞采用體積比1:1的2％TritonX-100處理2 小時(shí)，破壞其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞滲透性。用去離子水清洗透化細(xì)胞，去除TritonX-100，按體積比1:1 加入葛根素0.2 mg/mL，蔗糖20g/L，磷酸緩沖液(PBS)pH 為8.0的轉(zhuǎn)化液，30 ℃、220rpm 搖床振蕩轉(zhuǎn)化48 小時(shí)，高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)得到新的產(chǎn)物產(chǎn)物1(摩爾百分比68

4、.75％)，原產(chǎn)物產(chǎn)物2 即葛根素7-O-葡萄糖苷摩爾百分比為24.90％。而在TritonX-100處理后用PBS 清洗透化細(xì)胞得到的產(chǎn)物主要為葛根素7-O-葡萄糖苷(摩爾百分比41.13％)，新產(chǎn)物摩爾百分比為9.13％。最優(yōu)細(xì)胞處理?xiàng)l件為用與細(xì)胞培養(yǎng)液等體積2％(v/v)TritonX-100 緩慢旋轉(zhuǎn)處理2 小時(shí)，用等體積水清洗后12000rpm 離心15min 收集菌體，重復(fù)洗滌2 次。最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件為葛根素0.2 mg/mL，