過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞DNA甲基化異常的研究.pdf

1、目的:
　　 通過研究過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞基因組DNA甲基化狀態(tài)、IL-2RG基因表達(dá)及其甲基化狀態(tài)，從而探討過敏性紫癜的表觀遺傳學(xué)改變。
　　 方法:
　　 (1)密度梯度離心分離正常人、病人的外周血單個核細(xì)胞;試劑盒提取RNA和DNA;
　　 (2)整體甲基化定量試劑盒檢測外周血單個核細(xì)胞中基因組DNA甲基化水平;
　　 (3)實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real

2、-time PCR）檢測DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)和甲基結(jié)合蛋白（MBD）的mRNA的表達(dá)水平;
　　 (4)甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)檢測IL-2RG啟動子區(qū)域DNA甲基化水平，實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測外周血單個核細(xì)胞中IL-2RG的mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)與正常對照組相比，過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞基因組DNA高甲基化(P=0.041)，而基因組DNA甲基化水平與過敏性紫癜患者活動性評分

3、之間沒有明顯相關(guān)性;且不同類型的過敏性紫癜患者之間基因組DNA甲基化水平亦沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 (2)過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞中DNMT1，DNMT3b和MBD1mRNA水平較正常對照組明顯升高(P=0.001，P=0.0001，P=0.014)，MBD2及MBD4的mRNA水平明顯降低(P=0.013，P=0.001)。過敏性紫癜患者DNMT3b的mRNA表達(dá)量與基因組DNA甲基化水平呈正相關(guān)(R=0.5

4、03，P=0.043)。
　　 (3)過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞中IL-2RG的mRNA水平較正常對照組明顯升高(P=0.018)，IL-2RG啟動子區(qū)域的甲基化水平較正常對照組明顯降低(P=0.048)。外周血單個核細(xì)胞中IL-2RG的mRNA的水平與IL-2RG啟動子區(qū)域甲基化水平呈負(fù)相關(guān)(R=0.549，P=0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞基因組DNA高甲基化，且可能與D