HCV C-Fc融合基因疫苗修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞功能研究.pdf

1、該研究旨在構(gòu)建出包含HCV C-Fc融合基因的可分泌型真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染經(jīng)體外活化的DC,利用已建立的表達(dá)HCV C抗原的靶細(xì)胞(SP2/0-HCV-C)及HCV感染荷瘤鼠(BALB/c小鼠)模型,觀察HCV C-Fc融合基因疫苗修飾的DC,誘導(dǎo)的特異性CTL、抗體強(qiáng)度,以及對(duì)T細(xì)胞的增殖作用.研究基因疫苗轉(zhuǎn)染前后,DC對(duì)抗原提呈作用的變化,探索HCV C-Fc融合基因疫苗修飾的DC,用于預(yù)防和治療HCV感染的可能性和可行性.研究?jī)?nèi)容及

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.該文選用人IgG1 Fc段基因作為目的基因,插入到含中國(guó)常見(jiàn)的HCV Ⅱ型H株C區(qū)基因的載體pcDNA3HCV C中,以此為基礎(chǔ)構(gòu)建了HCV C-Fc融合基因的真核表達(dá)載體pcDNA3HCV-Fc.2.培養(yǎng)DC體外轉(zhuǎn)染后對(duì)CD<,4><'+>T細(xì)胞的增殖作用:闡明DC轉(zhuǎn)染前后功能的變化:包括對(duì)CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T細(xì)胞的增殖作用;分泌細(xì)胞因子水平,如:IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-5以

3、及IL-10等.3.比較不同基因疫苗修飾的DC誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生的強(qiáng)度以及誘導(dǎo)CTL的殺傷作用:將從BALB/c小鼠外周血中分離出的單個(gè)核細(xì)胞,在體外與IL-4、GM-CSF共孵育,誘導(dǎo)DC活化和增殖.4.以HCV-C-SP2/0皮下接種建立的HCV荷瘤鼠為HCV感染動(dòng)物模型,研究接種不同基因疫苗修飾的DC對(duì)成瘤時(shí)間、腫瘤大小及小鼠存活時(shí)間的影響,從而了解不同基因疫苗修飾的DC誘導(dǎo)的CTL的強(qiáng)度.將pcDNA3HCV-Fc質(zhì)粒用電穿孔法