多指標(biāo)分析方法在活血化瘀中藥復(fù)方制劑質(zhì)控方面的應(yīng)用研究.pdf

1、活血化瘀是中醫(yī)的一個重要理論和治療原則，《內(nèi)經(jīng)》記載的“疏其氣血、令其調(diào)達(dá)”，已成為后世活血化瘀治療原則的基礎(chǔ)。隨著對活血化瘀中藥的深入研究，發(fā)現(xiàn)其具有改善血流動力學(xué)異常、改善血液流變學(xué)異常、改善微循環(huán)障礙、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化及心肌缺血、抑制組織異常增生等藥理作用，被廣泛應(yīng)用于臨床各科，涉及心腦血管疾病、糖尿病、肝硬化、腫瘤等數(shù)十種疾病，臨床療效顯著，展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。
　　正是由于中藥制劑在臨床上的廣泛應(yīng)用，中藥制劑

2、難免良莠不齊，為了保證中藥復(fù)方制劑的安全性與有效性，對其質(zhì)量控制的方法與手段成為中藥現(xiàn)代化的最重要研究課題之一。現(xiàn)行的中藥質(zhì)量控制模式是借鑒國外化學(xué)藥品質(zhì)量控制模式建立的，化學(xué)藥品具有明確的分子結(jié)構(gòu)，清晰的構(gòu)效關(guān)系，因此鑒別、檢查、含量測定都可以直接作為質(zhì)量評價的指標(biāo)，但是對于在中醫(yī)理論指導(dǎo)下的中藥，尤其是復(fù)方制劑，檢測其中任何一種成分均不能體現(xiàn)其整體質(zhì)量。因此，需要重新審視和明確中藥質(zhì)量控制和評價的目標(biāo)、策略、模式與方法，建立一套既能

3、保證穩(wěn)定可控，又能直接體現(xiàn)安全有效的新型中藥質(zhì)量控制管理方法體系。《中國藥典》2010年版收載的中藥部分對其質(zhì)控含量測定的成分，一種是活性有效成分，一種是指標(biāo)成分，即既可能是活性成分，也可能是非活性成分，上世紀(jì)七十年代以來，高效液相色譜法(HPLC)以其在含量測定方面的獨(dú)特優(yōu)勢:分離效能高、分析速度快、重現(xiàn)性好、流動相選擇性廣、色譜柱可反復(fù)使用等，被大量地應(yīng)用于有效成分及指標(biāo)成分的質(zhì)量控制，在中藥制劑質(zhì)量控制中占有非常重要的地位。隨著H

4、PLC方法的普及應(yīng)用，2010年版《中國藥典》所載中藥部分的含量測定方法已達(dá)到709種采用的是高效液相色譜法。
　　為了使活血化瘀中藥復(fù)方制劑得到安全、廣泛的應(yīng)用，對其指標(biāo)成分的質(zhì)量控制就成為我們研究的主要對象。藥品質(zhì)量的可控性是藥品的基本屬性，是藥品的安全性和有效性的基礎(chǔ)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是控制藥品質(zhì)量的重要手段，能有效的控制藥品的質(zhì)量，確保用藥的安全，是質(zhì)量可控性的具體體現(xiàn)。本課題選用唐山工人醫(yī)院內(nèi)常用活血化瘀中藥:參芍口服液（醫(yī)院制

5、劑）、芪龍膠囊、益心舒膠囊、消栓通絡(luò)膠囊（等3種市售品種）中的丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B等多種成分作為研究對象，采用多波長反相高效液相色譜法對復(fù)方制劑中有效成分的質(zhì)量控制進(jìn)行較為系統(tǒng)的方法學(xué)研究，所建立的方法專屬性強(qiáng)、精密度和穩(wěn)定性良好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可為活血化瘀中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)、有效的試驗(yàn)方法與依據(jù)。本文從以下四部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分:參芍口服液中的丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚

6、酸B的多波長RP-HPLC法測定
　　目的:建立參芍口服液的五種有效成分（丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B）的RP-HPLC定量分析方法，為參芍口服液質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　方法:采用Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5μ，安捷倫公司)色譜柱，流動相為0.5％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)-乙腈(C)進(jìn)行梯度洗脫;流速:1.0mL/min;檢測波長:280nm、230nm、320nm;柱溫:30

7、℃;進(jìn)樣量為10μL。
　　結(jié)果:在此色譜條件下，5種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為:24～384μg/mL(r2=1)，1.25～20μg/mL(r2=0.9998),40.5～648μg/mL(r2=0.9996),1.5～24μg/mL(r2=0.9999)，145～2320μg/mL(r2=0.9999)，平均回收率為丹參素100.8％(RSD=1.29％)，原兒茶醛100.2％

8、(RSD=2.27％)，芍藥苷99.6％(RSD=0.93％)，阿魏酸100.2％(RSD=1.18％)，丹酚酸B99.3％(RSD=2.46％)。
　　結(jié)論:采用多波長RP-HPLC法建立了參芍口服液中五種有效成分（丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B）的含量測定方法。所建立方法專屬性強(qiáng)，精密度、準(zhǔn)確度好，為參芍口服液綜合質(zhì)量控制提供了質(zhì)控依據(jù)。
　　第二部分:多波長反相高效液相色譜法測定芪龍膠囊中丹參素、原兒茶醛、

9、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的含量
　　目的:利用反相高效液相色譜法測定芪龍膠囊中丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的含量，為該制劑的質(zhì)控提供參考。
　　方法:采用Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司)色譜柱，流動相為0.5％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)-乙腈(C)進(jìn)行梯度洗脫;流速:1.0mL/min;檢測波長:280nm、230nm、320nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量為10μL。<

10、br>　　結(jié)果:在此色譜條件下，5種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為:4.24～132.29μg/mL(r2=1),0.36～11.23μg/mL(r2=0.9998),23.71～379.39μg/mL(r2=1),0.7～11.2μg/mL(r2=0.9999)，200～3200μg/mL(r2=0.9998)，平均回收率為丹參素100.1％(RSD=1.40％)，原兒茶醛99.9％(RSD

11、=2.70％)，芍藥苷99.8％(RSD=1.47％)，阿魏酸102.0％(RSD=3.11％)，丹酚酸B99.9％(RSD=1.41％)。
　　結(jié)論:該方法簡單快速，5種成分分離效果好，可用于芪龍膠囊質(zhì)量控制。
　　第三部分:多波長HPLC-DAD法測定益心舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量
　　目的:通過對益心舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的HPLC-DAD法測定，為該制劑的質(zhì)控提供參考依

12、據(jù)。
　　方法:采用Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司)色譜柱，流動相為0.5％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)-乙腈(C)進(jìn)行梯度洗脫;流速:1.0mL/min;檢測波長:280nm、320nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量為10μL。
　　結(jié)果:在此色譜條件下，4種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為:9～144μg/mL(r2=0.9999)，0.5～8μg/m

13、L(r2=0.9998),0.65～10.4μg/mL(r2=0.9997),221.25～3540μg/mL(r2=0.9997)，平均回收率為丹參素100.7％(RSD=1.75％)，原兒茶醛100.3％(RSD=2.89％)，阿魏酸100.2％(RSD=3.16％)，丹酚酸B99.7％(RSD=2.04％)。
　　結(jié)論:采用HPLC-DAD法，同時測定益心舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B含量，該法簡單易行、重現(xiàn)性好

14、，可用于益心舒膠囊質(zhì)量控制。
　　第四部分:多波長高效液相色譜法測定消栓通絡(luò)膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量
　　目的:利用多波長高效液相色譜法，對消栓通絡(luò)膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量進(jìn)行定量分析，為該制劑的質(zhì)控提供方法學(xué)參考。
　　方法:采用Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司)色譜柱，流動相為0.5％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)-乙腈(C)進(jìn)行梯

15、度洗脫;流速:1.0mL/min;檢測波長:280nm、320nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量為10μL。
　　結(jié)果:在此色譜條件下，4種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為:12～192μg/mL(r2=0.9998)，1～16μg/mL(r2=0.9999),0.4～6.4μg/mL(r2=0.9999),62.5～1000μg/mL(r2=0.9999)，平均回收率為丹參素100.8％(RSD=1.4