10個(gè)遺傳性異常纖維蛋白原血癥家系的臨床和基因分析.pdf

1、遺傳性異常纖維蛋白原血癥(dysfibrinogenemia)是一種纖維蛋白原基因缺陷致纖維蛋白原(Fibrinogen，F(xiàn)g)分子結(jié)構(gòu)異常和功能缺陷的罕見遺傳性疾病，多數(shù)為常染色體顯性或共顯性遺傳，少數(shù)為常染色體隱形遺傳。該病臨床表現(xiàn)多樣，約55％的患者無臨床癥狀，約25%表現(xiàn)為出血，約20%有血栓形成傾向，而部分患者既有出血表現(xiàn)又有血栓形成。纖維蛋白原基因突變是導(dǎo)致遺傳性異常纖維蛋白原血癥的分子基礎(chǔ)，大部分突變?yōu)辄c(diǎn)突變，其次為小片段

2、缺失或插入等。本研究分析了10個(gè)遺傳性異常纖維蛋白原血癥家系的表型和基因型，以探討該病的分子致病機(jī)理。
　　目的
　　(1)對10個(gè)遺傳性異常纖維蛋白原血癥家系進(jìn)行臨床診斷、家系調(diào)查及表型研究，了解其臨床及實(shí)驗(yàn)室檢測的特征。(2)對10例遺傳性異常纖維蛋白原血癥患者及家系成員的Fg基因進(jìn)行測序，尋找突變位點(diǎn)，分析其遺傳特征及突變規(guī)律，并對其發(fā)病分子機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法
　　用全自動(dòng)生化分析儀檢測10個(gè)家系

3、所有成員血清肝腎功能；全自動(dòng)血液凝固分析儀檢測血漿凝血酶原時(shí)間(Prothrombin time，PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(Activated partial thromboplastin time，APTT)、凝血酶時(shí)間(Thrombintime，TT)、纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(Fibrin(ogen)degradation products，F(xiàn)DPs)、D二聚體(D-dimer，D-D)及硫酸魚精蛋白對TT的校正實(shí)驗(yàn)；用Clau

4、ss法和免疫比濁法分別檢測Fg的活性和抗原；提取各先證者及其家系成員外周靜脈血細(xì)胞的基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)擴(kuò)增纖維蛋白原基因FGA、FGB和FGG的所有外顯子及其側(cè)翼序列并測序，將測序結(jié)果與美國NCBI基因庫所公布的序列(FGA NG_008832.1，F(xiàn)GB NG_008833.1，F(xiàn)GG NG_008834.1)進(jìn)行比較，尋找基因突變類型和位點(diǎn)。對于新發(fā)現(xiàn)的突變，

5、我們采集100例正常人外周血，提取基因組DNA，對相應(yīng)區(qū)域的基因經(jīng)PCR擴(kuò)增并測序以排除多態(tài)性。
　　結(jié)果
　　1.10例遺傳性異常纖維蛋白原血癥先證者中8例無臨床癥狀，1例表現(xiàn)為易發(fā)生瘀斑、傷口愈合遲延且有自發(fā)性流產(chǎn)史，1例表現(xiàn)為經(jīng)血過多、輕傷后出血難止。
　　2.10例遺傳性異常纖維蛋白原血癥先證者血清肝腎功能均正常；血漿PT、APTT正?；蜉p度延長；FDPs、D二聚體均正常；TT明顯延長，且硫酸魚精蛋白不能使其明

6、顯縮短；Fg抗原在正常范圍內(nèi)，F(xiàn)g活性明顯下降，F(xiàn)g抗原/活性比值>2。
　　3.各家系基因型檢測結(jié)果：10例先證者中有1例為纖維蛋白原FGA基因g.1233G>A雜合堿基改變(密碼子CGT>CAT)，導(dǎo)致p.AaArg35His雜合突變；4例為纖維蛋白原FGB基因g.9692A>G雜合堿基改變(密碼子AAT>AGT)，導(dǎo)致p.BβAsn190Ser雜合突變；1例為纖維蛋白原FGG基因g.12688 G>A雜合堿基改變(密碼子GG

7、C>GAC)，導(dǎo)致p.γGly378Asp雜合突變；1例為纖維蛋白原FGG基因g.9135 G>T雜合堿基改變(密碼子TGG>TTG)，導(dǎo)致p.γTrp234Leu雜合突變；還有3例纖維蛋白原分子FGG基因g.10819 G>A雜合堿基改變(密碼子CGC>CAC)，導(dǎo)致p.γArg301His雜合突變。此外，還發(fā)現(xiàn)2個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)：1例先證者FGA基因g.9308A/G多態(tài)性位點(diǎn)檢測到純合突變型GG)即p。AαThr331Ala；3例先證

8、者FGB基因g.12628 G/A多態(tài)性位點(diǎn)檢測到478雜合突變型(GA)即p.BβArg478Lys。
　　結(jié)論
　　(1)10例先證者的臨床表現(xiàn)符合遺傳性異常纖維蛋白原血癥的一般臨床表現(xiàn)，與國際報(bào)道相似。
　　(2)10例先證者肝腎功能、FDPs、D二聚體均正常，PT、APTT正?；蜉p度延長；TT明顯延長，且不能被硫酸魚精蛋白校正；Fg抗原正常，F(xiàn)g活性明顯下降，抗原/活性比值均>2，符合遺傳性異常纖維蛋白原血癥的

9、表型診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　(3)10例先證者遺傳性異常纖維蛋白原血癥分別由p.AαArg35His、p.BβAsn190Ser、p.γTrp234Leu、p.γArg301His和p.γGly378Asp突變所致。p.BβAsn190 Ser為國內(nèi)首次報(bào)道；p.γTrp234Leu和p.γGly378Asp為國際首次報(bào)道，這兩種突變對纖維蛋白原功能的影響有待進(jìn)一步的研究。p.BβAsn190Ser和p.γArg301His可能為中國人的