基因芯片分析EB病毒LMP1誘導(dǎo)鼻咽癌干細(xì)胞增殖的機(jī)制.pdf

1、目的：鼻咽癌（NPC）的發(fā)病與EB病毒感染密切相關(guān)，EB病毒編碼的潛伏性膜蛋白1（LMP1）是其重要致瘤蛋白。本研究旨在探討LMP1羧基末端CTAR2的TRADD活性區(qū)在鼻咽癌干細(xì)胞SP18增殖中的作用及機(jī)制，為揭示EBV的致瘤機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：培養(yǎng)產(chǎn)RV-LMP1和RV-LMP1TRADD逆病毒的PA317細(xì)胞，收集細(xì)胞上清，分別感染鼻咽癌干細(xì)胞SP18，經(jīng)G418篩選后融合克隆，免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測LMP1和 LM

2、P1TRADD蛋白的表達(dá)，建立表達(dá) LMP1及 CTAR2突變 LMP1（LMP1TRADD）的SP18細(xì)胞系，即SP18-LMP1細(xì)胞和SP18-LMP1TRADD細(xì)胞。然后繪制細(xì)胞生長曲線、平皿克隆實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)觀察LMP1TRADD對 SP18增殖的影響。然后，采用基因芯片檢測 SP18-LMP1細(xì)胞和SP18-LMP1TRADD細(xì)胞間的差異表達(dá)基因，并選用RT-PCR驗(yàn)證部分基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：

3、>　　1、免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，建立的SP18-LMP1細(xì)胞和SP18-LMP1TRADD細(xì)胞均在細(xì)胞膜和漿中表達(dá)LMP1蛋白。
　　2、繪制的細(xì)胞生長曲線結(jié)果顯示，SP18-LMP1細(xì)胞生長速度較SP18-LMP1TRADD細(xì)胞快。
　　3、軟瓊脂集落和平皿克隆結(jié)果顯示，SP18-LMP1細(xì)胞較SP18-LMP1TRADD細(xì)胞形成的集落數(shù)多，體積大。
　　4、流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，SP18-LMP1細(xì)胞S期和G

4、2期細(xì)胞比例較SP18-LMP1TRADD細(xì)胞多，細(xì)胞增殖指數(shù)高。
　　5、經(jīng)基因芯片共檢測出428個差異表達(dá)基因，其中與細(xì)胞增殖相關(guān)基因76個（上調(diào)基因38個，下調(diào)基因38個）。
　　6、RT-PCR驗(yàn)證部分基因的表達(dá)情況與基因芯片檢測結(jié)果基本一致。
　　結(jié)論：
　　1、TRADD活性區(qū)是LMP1影響SP18細(xì)胞增殖的重要功能活性位點(diǎn)。
　　2、TRADD活性區(qū)通過提高S期和G2期細(xì)胞比例，增加細(xì)胞的增殖