姜黃素對(duì)鼻咽癌NCE細(xì)胞的抗增殖效應(yīng)及其誘導(dǎo)凋亡機(jī)制.pdf

1、目的及研究背景 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)發(fā)病居頭頸部惡性腫瘤之首，也是我國南方地區(qū)高發(fā)的惡性腫瘤，發(fā)病年齡以40～50歲為高發(fā)組。單純放療僅適合于早期鼻咽癌，大多數(shù)鼻咽癌患者就診時(shí)多為晚期(Ⅲ+Ⅳ期約占85％)，中晚期或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者，目前采用放化療相結(jié)合的治療手段。頭頸部惡性腫瘤常選用以DDP+5-FU為基礎(chǔ)的化療方案，是治療鼻咽癌的最有效藥物之一，但由于年齡及本病的特點(diǎn)，患者往往不能耐

2、受現(xiàn)有大劑量化療和放療。 姜黃素(Curcumin，Cur)系從姜科植物姜黃中提取的酚性有效單體化合物，有抗氧化、抗突變、抗促癌、抗炎等廣泛的藥理作用，且價(jià)格低廉，毒性很低。關(guān)于該藥對(duì)鼻咽癌細(xì)胞作用的研究，國內(nèi)外的相關(guān)報(bào)道較少。本課題研究姜黃素對(duì)鼻咽癌NCE細(xì)胞增殖的抑制作用，及其誘導(dǎo)NCE細(xì)胞凋亡的機(jī)制，為姜黃素的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)、奠定理論基礎(chǔ)。 方法 1.觀察姜黃素對(duì)鼻咽癌NCE細(xì)胞增殖的影響：應(yīng)用MTT

3、比色法、集落形成實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)姜黃素對(duì)鼻咽癌NCE細(xì)胞增殖能力的影響。 2.研究姜黃素對(duì)鼻咽癌NCE細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用：應(yīng)用AO/EB復(fù)合染色、電鏡、DNA片段化分析、TUNEL方法等檢測(cè)姜黃素對(duì)鼻咽癌NCE細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。 3.探討姜黃素誘導(dǎo)鼻咽癌NCE細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。 ①應(yīng)用FCM探討姜黃素對(duì)NCE細(xì)胞線粒體膜電位(△ψm)和Caspase3酶活性的影響。 ②應(yīng)用Westernblot技術(shù)檢測(cè)姜黃

4、素對(duì)胞漿CytC蛋白表達(dá)的影響。 ③應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)、RT-PCR等方法探討姜黃素對(duì)FasmRNA及蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果 1.姜黃素可明顯抑制NCE細(xì)胞增殖：MTT比色法、集落形成實(shí)驗(yàn)均顯示：25μmol/L濃度的姜黃素即能抑制NCE細(xì)胞增殖，且隨著藥物濃度的升高該抑制作用明顯增強(qiáng)，呈量效關(guān)系。 2.姜黃素可誘導(dǎo)NCE細(xì)胞凋亡：AO-EB染色可見NCE細(xì)胞核內(nèi)濃縮聚集的染色質(zhì)，呈現(xiàn)凋亡表象；電鏡

5、下可觀察到線粒體腫脹、凋亡小體等細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)改變；DNA片段化分析可見典型的DNA降解“梯狀”條帶片段；TUNEL檢測(cè)可見明顯的棕色核凋亡細(xì)胞，與姜黃素共孵育12h、24h、48h的陽性率分別為25.6％、40.3％、54.5％。上述結(jié)果提示姜黃素可誘導(dǎo)NCE細(xì)胞凋亡。 3.姜黃素可啟動(dòng)NCE細(xì)胞線粒體凋亡途徑和膜死亡受體途徑： ①FCM檢測(cè)示：姜黃素處理后NCE細(xì)胞△ψm下降，12h、24h、48h時(shí)的細(xì)胞陽性率

6、分別是26.8％、42.3％、68.2％。Caspase3酶活性增強(qiáng)，12h、24h、48h時(shí)的細(xì)胞陽性率分別是80.5％、100％、100％。 ②Westernblot檢測(cè)示：姜黃素處理后，NCE細(xì)胞胞漿Cyt-C蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)，48h達(dá)到峰值。 ③FCM檢測(cè)示：與姜黃素共孵育12h、24h、48h后，NCE細(xì)胞的Fas蛋白表達(dá)率明顯升高。RT-PCR顯示FasmRNA表達(dá)增強(qiáng)，并隨作用時(shí)間的延長表達(dá)上調(diào)。