豬附紅細(xì)胞體套式PCR診斷方法的建立及人工感染動物模型的研究.pdf

1、附紅細(xì)胞體病(Eperthrozoonsis)是附紅細(xì)胞體(Eperthrozoon，簡稱附紅體)寄生于紅細(xì)胞表面、血漿、組織液及腦脊液中，引起貧血、黃疸、發(fā)熱等的一種人、畜、禽共患的傳染性疾病。近幾年，國內(nèi)對豬附紅細(xì)胞體病的報道日益增多。為明確該病的發(fā)病、感染狀況，本研究在對發(fā)病豬場進(jìn)行疫情調(diào)查、臨床癥狀、剖檢病理變化、鮮血壓片和血液推片染色診斷方法檢查的基礎(chǔ)上，建立套氏PCR診斷方法，并對該病建立人工感染動物模型，證實不同動物在附紅

2、細(xì)胞體的傳播過程中發(fā)揮著重要作用。 本研究包括三個試驗：試驗一，豬附紅細(xì)胞體病套氏PCR診斷方法的研究；試驗二，豬附紅細(xì)胞體病動物感染模型的建立；試驗三，豬附紅細(xì)胞體病在多種動物中交叉感染的研究。 試驗一豬附紅細(xì)胞體病套氏PCR診斷方法的研究 以無菌法采取自然發(fā)病的豬附紅細(xì)胞體病的血液，用阿氏液抗凝后，從血液中分離純化E．suis，提取DNA。根據(jù)GenBank收錄的豬附紅細(xì)胞體16S rRNA基因序列為例，設(shè)計

3、兩對特異引物，建立了一種快速、準(zhǔn)確檢測豬附紅細(xì)胞體的套式PCR方法，凝膠電泳定性，經(jīng)擴(kuò)增后得到了一長度為498 bp的特異條帶，測序鑒定確為目的片段；結(jié)果表明，建立的套氏PCR檢測方法具有高度的特異性和敏感性，能夠客觀的反映附紅細(xì)胞體病發(fā)病情況，可用于附紅細(xì)胞體病的檢測。 試驗二豬附紅細(xì)胞體病動物感染小鼠模型的建立 用多種診斷方法確定陽性血液樣品，分別經(jīng)腹腔、皮下及肌肉感染小鼠，定期采血，進(jìn)行常規(guī)血涂片染色，并從血液中分

4、離純化Esuis，提取DNA，進(jìn)行套式PcR法擴(kuò)增，凝膠電泳定性，得到目的片段；在整個實驗過程中未見感染小鼠明顯的臨床癥狀；附紅細(xì)胞體的感染方式有以下幾種：腹腔、皮下及肌肉感染。可以用小鼠建立豬附紅細(xì)胞體動物感染動物模型，進(jìn)行抗附紅細(xì)胞體藥物篩選。 試驗三豬附紅細(xì)胞體病在多種動物中交叉感染的研究 首先將診斷為陽性的豬附紅細(xì)胞體血液，進(jìn)行附紅細(xì)胞體分離純化，然后將純化的豬附紅細(xì)胞體人工感染大鼠、家兔和雛雞三種實驗動物，并用