姜黃素對脂肪變性人肝HL-7702細胞乙酰CoA羧化酶mRNA表達的影響.pdf

1、目的：觀察姜黃素對脂肪變性人肝HL-7702細胞甘油三酯沉積及乙酰CoA羧化酶（ACC）mRNA表達的影響。 方法：采用隨機對照研究，以離體人肝HL-7702細胞為研究對象。用10％（V/V）醫(yī)用脂肪乳注射液和10％（V/V）胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝HL-7702細胞24小時，制備肝細胞脂肪變性模型。實驗分為6組：第1組為空白對照，即正常肝細胞組；第2組為脂變肝細胞組；第3組至第6組在脂變細胞中分別加入不等

2、量姜黃素，使姜黃素終濃度分別為12.5μmol/L、 25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L。每組加藥后繼續(xù)孵育24小時。油紅O染色觀察每組細胞形態(tài)和細胞內(nèi)脂滴的形成情況，高效液相色譜法（HPLC）檢測細胞內(nèi)甘油三酯的含量，半定量RT-PCR法檢測每組肝細胞乙酰CoA羧化酶mRNA水平的表達。根據(jù)姜黃素改善細胞內(nèi)甘油三酯含量的情況，作出量效關(guān)系。然后以姜黃素100μmol/L濃度分別孵育模型組細胞6h,12h,24h,4

3、8h，使用上述觀察方法，確定姜黃素改善細胞脂肪變性的最佳時間，作出時效關(guān)系。實驗數(shù)據(jù)以±s表示，用SPSS10.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，以P＜0.05作為差異顯著性標準。 結(jié)果：用10％脂肪乳注射液孵育人肝HL-7702細胞24小時后，油紅O染色后倒置顯微鏡下可觀察到HL-7702細胞脂肪變性，胞漿內(nèi)充滿大量被油紅O紅染的脂滴，且高效液相色譜法檢測細胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增加（P＜0.01），示脂變肝細胞模型成功建立。加入不同濃

4、度的姜黃素（12.5μmol/L、 25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）處理24小時后, 油紅O染色見細胞內(nèi)脂滴較處理前減少,脂肪化程度減輕，高效液相色譜顯示細胞內(nèi)甘油三酯減少，與姜黃素呈劑量依賴性關(guān)系。RT-PCR顯示肝細胞脂肪變性后ACC的mRNA表達增強，加入姜黃素處理后ACC的mRNA表達減弱，亦與姜黃素呈劑量依賴性關(guān)系。以姜黃素100μmol/L濃度為處理濃度，與脂變肝細胞共同孵育6，12，24小時,結(jié)果顯