沐舒坦抗急性肺損傷作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：觀測兔油酸型急性肺損傷時氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子、細(xì)胞黏附分子、細(xì)胞凋亡及肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化，探討鹽酸氨溴索注射液(沐舒坦)抗急性肺損傷作用及其機(jī)制。 方法：采用耳緣靜脈注射復(fù)制兔油酸型急性肺損傷模型。健康日本大耳白兔24只，雌雄不拘，隨機(jī)分為3組，每組8只：正常對照組(normalcontrolgroup，NC組)，急性肺損傷組(acutelunginjurygroup，ALⅠ組)，沐舒坦治療組(ambroxol+acute

2、lunginjurygroup，AMB組)。動物模型制備成功后，各組在注入沐舒坦(mucosolvan，AMB)或生理鹽水(以下簡稱給藥)前和給藥后6小時抽取血液標(biāo)本檢測血清白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、E-選擇素、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)含量；給藥后6小時處死動物并留取支氣管肺泡灌洗液(BALF)及肺組織勻漿標(biāo)本檢測IL-1β、TNF-α、E-選擇素和ICAM-1含量及超氧化物歧化酶(SOD

3、)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、黃嘌呤氧化酶(XO)活力和丙二醛(MDA)含量。檢測肺組織勻漿caspase-3活力、肺組織原位凋亡細(xì)胞及P-選擇素表達(dá)變化。檢測肺組織濕干比(W/D)，光鏡觀察肺組織病理改變，電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果： 1.肺組織大體標(biāo)本觀察，NC組肺外觀正常；ALⅠ組肺外觀呈暗紅色，可見肺包膜下廣泛充血水腫，彈性降低，表面有彌漫的出血點、灶性實變及梗死；AMB組肺外觀顏色不均勻，呈

4、現(xiàn)部分的充血、水腫，表面有散在的出血斑點，彈性輕度降低。光鏡觀察，NC組肺組織結(jié)構(gòu)正常；ALⅠ組可見肺間質(zhì)明顯水腫，組織疏松，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血明顯，肺泡間隔炎性細(xì)胞浸潤；AMB組肺組織病理變化明顯減輕。電鏡觀察，NC組Ⅱ肺泡上皮細(xì)胞(ATⅡ細(xì)胞)超微結(jié)構(gòu)正常；ALⅠ組ATⅡ細(xì)胞明顯水腫，板層小體數(shù)目增加，多數(shù)板層小體排空現(xiàn)象明顯，形成空泡，微絨毛脫落。AMB組ATⅡ細(xì)胞輕度水腫，板層小體運動到細(xì)胞的一側(cè)進(jìn)行胞外分泌；板層小體排空及微絨

5、毛脫落現(xiàn)象明顯減少。 2.AMB組肺W/D顯著低于ALⅠ組(P＜0.01)，但顯著高于NC組(P＜0.05)。 3.AMB組BALF中GSH-Px和SOD活力顯著高于ALⅠ組及NC組(P＜0.01)，XO活力和MDA含量顯著低于ALⅠ組和NC組(P＜0.01)。AMB組肺組織勻漿GSH-Px活力顯著高于NC組和ALⅠ組(P＜0.01)；SOD活力顯著高于ALⅠ組(P＜0.05)，但低于NC組(P＜0.01)；XO活力顯著

6、低于ALⅠ組(P＜0.05)，與NC組無顯著性差異(P＞0.05)；MDA含量顯著低于ALⅠ組(P＜0.01)，但高于NC組(P＜0.01)。 4.AMB組和NC組給藥后6小時血清IL-1β含量與給藥前比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＞0.05)，而TNF-α含量顯著高于給藥前(P＜0.001)；ALⅠ組給藥后6小時血清IL-1β和TNF-α含量均顯著高于給藥前(P＜0.001)。給藥前三組血清IL-1β含量比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P

7、＞0.05)，而AMB組和ALⅠ組的TNF-α含量均顯著高于NC組(P＜0.05)；給藥后6小時AMB組血清IL-1β和TNF-α含量均顯著低于ALⅠ組(P＜0.01)，與NC組比較，血清TNF-α含量顯著高于NC組(P＜0.01)，IL-1β含量無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＞0.05)。 5.AMB組BALF和肺組織勻漿中IL-1β和TNF-α含量均顯著低于ALⅠ組(P＜0.01)，但均高于NC組(P＜0.01)。 6.AM

8、B組和NC組給藥后6小時血清ICAM-1含量與給藥前比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＞0.05)，而E-選擇素含量顯著高于給藥前(P＜0.001)；ALⅠ組給藥后6小時血清E-選擇素和ICAM-1含量均顯著高于給藥前(P＜0.001)。給藥前三組血清ICAM-1含量比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＞0.05)，而AMB組和ALⅠ組的E-選擇素含量均顯著高于NC組(P＜0.01)；給藥后6小時AMB組血清E-選擇素和ICAM-1含量均顯著低于ALⅠ組

9、(P＜0.01)，與NC組比較，血清E-選擇素含量顯著高于NC組(P＜0.01)，而ICAM-1含量無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＞0.05)。 7.AMB組BALF和肺組織勻漿中E-選擇素和ICAM-1含量均顯著低于ALⅠ組(P＜0.01)，但均高于NC組(P＜0.01)。 8.三組兔肺組織P-選擇素免疫組化染色強(qiáng)度比較有顯著差異(P＜0.05)，但陽性率級別比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＞0.05)。AMB組P-選擇素免疫組化染

10、色多為淡黃色或棕黃色，ALⅠ組則棕黃色居多，而NC組多為淡黃色。 9.AMB組肺組織勻漿caspase-3活力顯著低于ALⅠ組(P＜0.05)。AMB組凋亡指數(shù)顯著低于ALⅠ組(P＜0.01)，但顯著高于NC組(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.沐舒坦能降低油酸型急性肺損傷兔肺濕干比，減輕肺組織炎癥嚴(yán)重程度，降低Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損害，改善Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞功能，有較好的抗急性肺損傷的作用。 2.沐舒坦

11、可通過糾正氧化/抗氧化失衡，減輕氧化應(yīng)激，而對急性肺損傷有治療作用。 3.沐舒坦能抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β等的釋放，而減輕急性肺損傷時肺組織炎癥反應(yīng)。 4.沐舒坦通過抑制ALI肺組織E-選擇素、P-選擇素及ICAM-1等細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，部分阻止PMN與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，進(jìn)而阻止PMN的跨膜運動和其在肺內(nèi)的聚集，從而發(fā)揮抗急性肺損傷的作用。 5.沐舒坦能抑制caspase-3的活化，減少肺組織細(xì)胞凋