外源性鋅對(duì)缺氧神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、意義：缺血缺氧性腦損傷是各種急、慢性缺血和/或缺氧病變引起的腦功能障礙，是神經(jīng)系統(tǒng)的常見(jiàn)病和多發(fā)病，病理過(guò)程極為復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制主要涉及腦組織能量代謝紊亂、興奮性氨基酸毒性、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、自由基損傷、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)以體外原代培養(yǎng)新生Wistar大鼠皮層神經(jīng)元為研究對(duì)象，觀(guān)察了加入不同濃度的外源性鋅后，神經(jīng)元[Zn<'2+>]i與[Ca<'2+>]i的變化，以期明確外源性鋅對(duì)于體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元的作用特點(diǎn)；在此基礎(chǔ)

2、上，分析了神經(jīng)元[Zn<'2+>]i與[Ca<'2+>]i的相關(guān)性；最后，在培養(yǎng)基中加入連二亞硫酸鈉(Na<,2>S<,2>O<,4>)，造成耗氧型神經(jīng)元損傷模型，觀(guān)察了低濃度外源性鋅對(duì)于神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的影響，以期了解耗氧型神經(jīng)元損傷模型的損傷機(jī)制和低濃度外源性鋅對(duì)于化學(xué)性缺氧神經(jīng)元保護(hù)作用的可能途徑。 目的：觀(guān)察在不同條件下加入不同濃度外源性鋅時(shí)原代培養(yǎng)的大鼠皮層神經(jīng)元[zn<'2+>]i與[Ca<'2+>]i的變

3、化，探討外源性鋅對(duì)于神經(jīng)元[Zn<'2+>]i與[Ca<'2+>]i的影響和低濃度外源性鋅對(duì)于化學(xué)性缺氧神經(jīng)元保護(hù)作用的可能機(jī)制。 方法： 1．體外原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元，加入不同濃度外源性鋅，以Fluo-3/AM為神經(jīng)元[ca<'2+>]i的指示劑，用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的時(shí)間變化； 2．加入不同濃度外源性鋅，以Ca<'2+>熒光探針為神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的指示劑，Zn<'2

4、+>熒光探針為神經(jīng)元[zn<'2+>]i的指示劑，用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)神經(jīng)元[Zn<'2+>]i與[Ca<'2+>]i的即時(shí)變化； 3．在培養(yǎng)基中加入連二亞硫酸鈉(Na<,2>S<,2>O<,4>)，造成神經(jīng)元氧消耗損傷模型，觀(guān)察了低濃度外源性鋅對(duì)于缺氧神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的影響。 結(jié)果： 1.外源性鋅在不同濃度時(shí)對(duì)于神經(jīng)元[Ca<'2+>]i和[Zn<'2+>]i的影響有所不同：低濃度(10μmo

5、l/L)鋅對(duì)神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的影響不明顯，中濃度(100μmol/L)鋅引起神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的一過(guò)性升高，高濃度(500μmol/L)鋅引起神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的持續(xù)性升高；隨著外源性鋅濃度的升高，神經(jīng)元[Ca<'2+>]i和[Zn<'2+>]i亦升高； 2．加入不同濃度外源性鋅，在100μmol/L組和500μmol/L組神經(jīng)元[Zn<'2+>]i和[Ca<'2+>]i的MFI均較對(duì)照組增高(P<0.

6、05)，呈劑量效應(yīng)關(guān)系；神經(jīng)元[Zn<'2+>]i的MFI較[Ca<'2+>]i的MFI高； 3．神經(jīng)元[Zn<'2+>]i與[Ca<'2+>]i(均以MFI表示)呈正相關(guān)關(guān)系，Spearman相關(guān)系數(shù)為0.763，P<0.01。 4．除低濃度鋅組外，各組神經(jīng)元[Zn<'2+>]i和[Ca<'2+>]i的MFI值均較對(duì)照組增高(P<0.05)；但低濃度鋅組以及低濃度+化學(xué)性缺氧組神經(jīng)元[Zn<'2+>]i和[Ca<'2+

7、>]i的MFI均較化學(xué)性缺氧組降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1．外源性鋅在不同濃度時(shí)對(duì)于神經(jīng)元[Ca<'2+>]i和[Zn<'2+>]i的影響有所不同，這可能與不同濃度的外源性鋅作用途徑不同有關(guān)； 2．鈣超載是連二亞硫酸鈉(Na<,2>S<,2>O<,4>)造成的神經(jīng)元氧消耗損傷模型的可能機(jī)制； 3．外源性鋅對(duì)于連二亞硫酸鈉(Na<,2>S<,2>O<,4>)造成的神經(jīng)元氧消耗損傷模型的保護(hù)作用可能是通