杜仲優(yōu)良品種（無性系）DNA指紋圖譜的構(gòu)建.pdf

1、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)屬于杜仲科杜仲屬，是一種以藥用為主并具有多種用途植物，作為杜仲資源開發(fā)中一項(xiàng)十分重要的基礎(chǔ)性工作，杜仲良種選育廣受重視。近年來，杜仲許多優(yōu)良品種(無性系)被陸續(xù)選育出來并用于生產(chǎn)栽培，但由于許多品種(無性系)間形態(tài)差異不大，因而品種識別較為困難。為了提供有效的杜仲品種鑒別方法，并研究品種之間的遺傳差異，本文用RAPD技術(shù)對14個(gè)杜仲優(yōu)良品種(無性系)進(jìn)行了DNA指紋的建立和分析，主要

2、研究結(jié)果如下： 1.改進(jìn)了杜仲基因組DNA提取方法，并對杜仲RAPD擴(kuò)增反應(yīng)程序進(jìn)行了優(yōu)化。用經(jīng)過改良的CTAB法提取的基因組DNA可以滿足RAPD擴(kuò)增的要求。本試驗(yàn)最終優(yōu)化反應(yīng)體系為： 25μL反應(yīng)體積中， 10×buffer 2.5μL，TaqDNA聚合酶1U，隨機(jī)引物(5μmol/L)2.0μL，MgCl<,2>(25mmol/L)2.0μL，dNTP(2.5mmol/L)2.0μL，模板2mg/L，補(bǔ)ddH<,2>O至2

3、5μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，37℃退火30s，72℃延伸90s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，4℃保持產(chǎn)物。 2.對500條隨機(jī)引物進(jìn)行篩選，選出32條擴(kuò)增條帶清晰，多態(tài)性好的引物。并用這32條引物對14個(gè)杜仲品種(無性系)進(jìn)行了擴(kuò)增，得到擴(kuò)增條帶191條，其中多態(tài)性條帶117條，多態(tài)位點(diǎn)百分率為61.26％。不同引物擴(kuò)增的條帶數(shù)在4-9之間，平均每個(gè)引物擴(kuò)增5.96條。 3.建立了1