番茄葉霉病菌生理小種DNA指紋圖譜的構(gòu)建.pdf

1、番茄葉霉病是危害番茄生產(chǎn)的一種嚴(yán)重病害，也是生理小種分化最激烈的病害之一。為了能夠有針對(duì)性的選擇使用抗源，對(duì)葉霉病菌生理小種的變化需要及時(shí)監(jiān)測(cè)，因此，急需研究找出一種快速簡(jiǎn)單、不受環(huán)境因素影響的鑒定新方法。
　　 本研究以番茄葉霉病菌8個(gè)已知生理小種和2009年采自東北三省的42個(gè)未知菌株為材料，利用SSR和AFLP分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建8個(gè)生理小種的DNA指紋圖譜，并依據(jù)分子指紋圖譜信息建立聚類樹狀圖，對(duì)8個(gè)生理小種進(jìn)行聚類分析。在

2、對(duì)42個(gè)未知菌株進(jìn)行常規(guī)寄主鑒定后，再利用篩選出的特異引物擴(kuò)增指紋，對(duì)比于已建立的圖譜，檢驗(yàn)圖譜鑒定和常規(guī)鑒定的符合率。本研究的主要研究成果如下：
　　 1.應(yīng)用SSR分子標(biāo)記技術(shù)篩選得到多態(tài)性豐富的引物3對(duì)，對(duì)8個(gè)番茄葉霉病菌供試生理小種進(jìn)行研究分析，建立DNA指紋圖譜。3對(duì)引物共擴(kuò)增出219條帶，擴(kuò)增出多態(tài)性條帶22條，多態(tài)性帶占總帶數(shù)的10.04％。每對(duì)引物得到的8個(gè)葉霉病菌生理小種的SSR指紋圖譜均不同，能將8個(gè)生理小種

3、完全區(qū)分開。AFLP技術(shù)因未能成功擴(kuò)增出條帶，不能用于8個(gè)生理小種指紋圖譜的構(gòu)建。
　　 2.依據(jù)SSR指紋圖譜反映出的信息建立聚類樹狀圖，聚類結(jié)果顯示：番茄葉霉病菌群體內(nèi)存在較豐富的遺傳多樣性。小種1.2.4和1.3之間相似系數(shù)值最大，為0.86；2.3與其它小種之間的相似系數(shù)最小，為0.53。在Dice相似系數(shù)0.53水平上，可以將供試的8個(gè)菌株劃分為2個(gè)類群。
　　 3.對(duì)2009年采自東北三省的番茄葉霉病菌菌株進(jìn)

4、行常規(guī)寄主鑒定，結(jié)果顯示供試的42個(gè)菌株分別屬于生理小種1.2、1.2.3.、1.2.3.4、1.2.4、1.3、1.3.4、1.4和2.3，全部為已經(jīng)鑒定存在的小種，其中以1.2.3.4為主流小種，約占調(diào)查總數(shù)的30.95％，；其次為生理小種1.2.3，約占調(diào)查總數(shù)的16.67％。試驗(yàn)鑒定并未發(fā)現(xiàn)新分化的生理小種。
　　 4.利用3對(duì)SSR特異引物M69、M80、M91對(duì)使用鑒別寄主法鑒定的42個(gè)菌株進(jìn)行擴(kuò)增，得到SSR指紋，