江蘇省海門市肝癌高發(fā)地區(qū)人群乙型肝炎病毒進化分析.pdf

1、江蘇省海門市地處長江三角洲地區(qū),是原發(fā)性肝細胞癌的高發(fā)幣。HBV感染是海門市肝癌高發(fā)的最重要危險因素,應在肝癌防治決策時予以充分重視。在同一生存環(huán)境條件下,HBV感染可促使肝癌發(fā)病年齡提前。
　　乙型肝炎病毒是一種DNA病毒,有四個重疊的開放讀碼框架(S、C、P和X)。S基因的變異可改變HBsAg的空間結構和免疫原性,導致其抗原性和蛋白表達水平下降。C基因變異將影響HBV病毒載量及HCC進程,其主要突變是nt1896G→A,使HB

2、eAg合成終止。HBV基本核心啟動子中最重要、最常見的基因突變是nt1762A→T、nt1764G→A雙突變,既增強HBV復制力,又降低HBeAg合成,還增加肝細胞凋亡,從而加重患者病情。P基因變異以YMDD基序的變異(aaM552V或aaM552I,生成YVDD或YIDD)最為重要,YMDD變異伴“a”決定簇內(nèi)變異時可使HBV的復制能力明顯增強。
　　目前發(fā)現(xiàn)的HBV已有A-J共10種基因型,我國主要流行的是B和C基因型。HBV

3、基因型與感染的預后有關,與B基因型相比,C基因型HBV與肝癌的發(fā)病更加密切,也會導致更嚴重的肝纖維化結局。而不同基因型混合感染可引起攜帶者肝炎復燃。
　　本研究采用多階段隨機抽樣,在充分考慮抽樣可行性和科學性的基礎上對海門市一般人群進行乙肝血清學調(diào)查,包括一般情況,肝炎患病史,乙肝病毒暴露史,乙肝疫苗免疫接種史等。采用ELISA檢測方法定性檢測HBsAg及半定量檢測抗-HBs,對HBsAg陽性血清抽提DNA,并用巢氏PCR擴增HB

4、VS基因及LA-PCR擴增HBVDNA,從而掌握當?shù)豀BV的流行規(guī)律、變異及主要基因型。
　　本項目調(diào)查對象共計5,624人,HBsAg陽性率為6.035％。不同性別人群間的HBsAg陽性率不存在統(tǒng)計學差異。＜30歲人群HBsAg陽性率明顯低于≥30歲人群HBsAg陽性率,10歲以下兒童HBsAg陽性率為0％。文化程度越高,HBsAg陽性率越低。醫(yī)護人員的HBsAg陽性率最低,農(nóng)民的HBsAg陽性率最高。長期一起生活的直系血親中有

5、乙肝患者人群的HBsAg陽性率遠高于直系血親中沒有乙肝患者人群的HBsAg陽性率。做過手術和做過內(nèi)窺鏡人群的HBsAg陽性率分別高于沒有做過的人群的HBsAg陽性率。獻血人群的HBsAg陽性率低于沒有獻血人群的HBsAg陽性率。不同出生地點調(diào)查對象的HBsAg陽性率存在統(tǒng)計學差異,表現(xiàn)為:出生于縣級以上醫(yī)院者＜出生于鄉(xiāng)鎮(zhèn)級醫(yī)院者＜出生于家中者。Logistic回歸分析顯示,乙肝感染相關因素中,長期一起生活的親人中患有乙肝、做過內(nèi)窺鏡是調(diào)

6、查對象乙肝感染的危險因素,而獻血是調(diào)查對象乙肝感染的保護因素。后者可能是健康工人偏倚所致。
　　抗-HBs滴度＜10IU/ml者占43.334％;抗-HBs滴度＞10IU/ml人群中,抗-HBs滴度越高所占構成比越高。HBsAg陰性人群與一般人群的抗-HBs滴度分布比例相似;HBsAg陽性人群中,抗一HBs滴度＜10IU/ml者所占比例為90.845％,抗-HBs滴度位于(10,160)IU/ml者所占比例均低于1.5％,但是抗-

7、HBs滴度＞160IU/ml者所占比例為5.282％。不同性別人群間抗-HBs滴度的分布比例基本相同。年齡越低,抗.HBs滴度＜10IU/ml者占該年齡段人群比例越低?？?HBs滴度＞10IU/ml人群中,小于10歲人群里位于(40,80]IU/ml者所占比例最低;[10,60)歲人群抗-HBs滴度分布與一般人群抗-HBs滴度分布相似;60歲以上人群各個抗-HBs滴度人群所占比例基本相同。不同文化程度和職業(yè)人群的抗-HBs滴度分布近似于

8、該年齡段人群的抗-HBs滴度分布。是否做過內(nèi)窺鏡(做過內(nèi)窺鏡者的抗-HBs滴度較低)和不同的出生地點(出生于縣級以上醫(yī)院＞鄉(xiāng)鎮(zhèn)級醫(yī)院＞在家出生者的抗.HBs滴度)對人群的抗-HBs滴度分布比例有影響。Logistic回歸分析顯示,乙肝感染相關因素中,是否做過內(nèi)窺鏡是抗-HBs是否具有保護作用的危險因素。
　　乙肝疫苗計劃免疫前出生人群的HBsAg陽性率遠高于乙肝疫苗計劃免疫后出生人群的HBsAg陽性率,抗-HBs平均滴度則表現(xiàn)相反

9、。曾經(jīng)在村醫(yī)或個體診所做過牙科診療、與家人共用牙刷和在鄉(xiāng)鎮(zhèn)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)級以上醫(yī)院出生的人群中,乙肝疫苗計劃免疫前出生人群HBsAg陽性率分別高于乙肝疫苗計劃免疫后出生人群的HBsAg陽性率,抗-HBs平均滴度則表現(xiàn)相反。
　　巢式PCR擴增HBVS基因檢測陽性率為45.8％。B基因型占10.8％,C基因型占86.9％,B/C混合型占2.3％。C基因型HBVS基因(特別在親水區(qū)(nt245-nt391))的變異度普遍高于B基因型。相同基因

10、型的不同患病類型乙肝患者的HBVS基因之間并無明顯分隔,而B基因型HBVS基因之間同源性更高。所有可能導致HBV的抗原性和免疫應答發(fā)生改變的樣本均為C基因型,占5.38％,平均年齡為46.71±1.17歲,抗-HBs均小于10IU/ml。海門市乙肝HBsAg主要為adrq+血清型(82.3％),其次為adw2血清型(16.2％)。
　　LA-PCR擴增HBVDNA檢測陽性率為15.4％,DNA在1814nt～2452nt區(qū)域相對比

11、較保守。4例樣本pre-C基因發(fā)生nt1896G→A單個堿基替換。B基因型HBVBCP并未發(fā)生雙重突變(nt1762A→T和nt1764G→A);C基因型HBVBCP中,發(fā)生雙重突變(nt1762A→T和nt1764G→A)的占全部C基因型的47.06％,僅發(fā)生nt1762A→T突變者占5.88％,僅發(fā)生nt1764G→A突變者占11.76％。海門市與黑龍江和上海的HBV平均進化距離差距最小,其次為北京、安徽、啟東、臺灣和西藏。海門市H

12、BV平均進化距離與中國其他地區(qū)HBV平均進化距離的差距主要出于基因型分布的差異所致。
　　就C基因型HBVDNA而言,海門株之間的進化距離比較大,也大于某些地區(qū)株與海門株之間的進化距離。海門株與本地區(qū)及其他各個地區(qū)株之間的pre-C/C基因、C基因和X基因進化距離普遍小于同樣地區(qū)之間的HBVDNA進化距離,而P基因的進化距離則普遍大于同樣地區(qū)之間的HBVDNA進化距離。與其他地區(qū)相比,海門株之間的pre-S1/pre-S2區(qū)域序列

13、變異程度較大,同源性較低。盡管海門市為HCC高發(fā)區(qū),但是從海門市一般人群中篩選出的HBVDNA與其他地區(qū)的HCC患者的HBVDNA之間的同源性并不高,反而與北京等地區(qū)的慢性HBV患者的HBVDNA之間的同源性較高。
　　經(jīng)過近二十年的乙肝疫苗計劃免疫工作,海門市HBV的預防工作卓有成效,HBV感染情況已經(jīng)得到明顯好轉。青少年的HBV感染率并未隨著年齡的增長而有所上升;而隨著當?shù)爻赡耆四挲g的增長,乙肝患者體內(nèi)HBV可能會被清除,或是

14、由于HBVS基因變異所致的HBsAg假陰性。
　　海門市HBV存在家庭內(nèi)或家族聚集感染,可能是垂直傳播,遺傳因素,水平傳播綜合作用的結果;從病毒學方面看,HBV家族聚集性感染和非家族聚集感染臨床類型差異不大。海門市HBV也通過內(nèi)窺鏡檢查進行傳播。僅出生地點的不同對HBV感染有影響,說明出生時所接受到的醫(yī)療水平程度對HBV感染有影響。乙肝疫苗計劃免疫對于中低教育程度和中低收入家庭來說,是預防HBV感染的主要途徑。鄉(xiāng)鎮(zhèn)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)以下級別醫(yī)

15、院的牙科診療可能是海門市HBV社會傳播的途徑之一,家庭內(nèi)共用牙刷可能也是海門市HBV家庭內(nèi)傳播的途徑之一。
　　綜上所述,海門市一般人群HBV感染的主要影響因素為:年齡、受教育程度、直系血親中是否有人患有乙肝、是否做過內(nèi)窺鏡、出生地點和乙肝疫苗計劃免疫。年齡、受教育程度和出生地點主要影響乙肝疫苗的免疫接種,而海門市HBV感染主要來源于垂直傳播途徑和通過內(nèi)窺鏡、牙科診療和家庭內(nèi)共用牙刷等水平傳播途徑。乙肝疫苗的及時接種是阻止海門市H

16、BV傳播的最有效的方法。
　　海門市HBVS基因已經(jīng)出現(xiàn)了能改變HBV抗原性和免疫原性的變異,應當密切關注以防止乙肝疫苗失效。海門市作為HCC高發(fā)區(qū),當?shù)豀BVDNA與其他非HCC高發(fā)區(qū)HBVDNA(無論是否來源于HCC患者)的差異并不顯著,X基因的差異甚至更小,提示盡管血清HBV病毒水平是HCC發(fā)生獨立的預期因素,且慢性乙型肝炎炎癥應答過程中逐漸累積的基因改變是HCC發(fā)生的最重要因素,但HBV的變異程度并不是海門市HCC高發(fā)的直