鋅α-,2-糖蛋白對3T3-L1小鼠前脂肪細胞增殖和分化的影響.pdf

1、目的： 肥胖已經成為危害人類健康的全球性健康問題，與2型糖尿病、高血壓、心腦血管疾病、部分腫瘤等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關。據世界衛(wèi)生組織最新報道，全球肥胖及超重人口已達20億，到2015年預計該數字將增加到30億。肥胖是能量攝入與消耗平衡破壞的結果，而其核心的病理生理學機制則是脂肪細胞數量的不斷增加與體積的不斷增大使得體內脂肪組織含量不斷增加，最終導致肥胖。上述過程通過前脂肪細胞的增殖與分化實現，因此對前脂肪細胞增殖與分化的

2、研究在肥胖發(fā)生機制的研究中具有舉足輕重的地位。鋅α2糖蛋白(ZAG)是近年來新發(fā)現的脂肪細胞因子之一，最初在腫瘤惡液質患者中發(fā)現該蛋白在惡液質的發(fā)生中發(fā)揮一定作用。進一步的動物研究與體外細胞研究證實，ZAG具有強烈的促脂肪分解作用，提示該蛋白有望在肥胖治療中發(fā)揮一定的作用。然而，目前為止，尚無有關ZAG對前脂肪細胞增殖與分化影響的研究報道，我們試圖就ZAG對3T3-L1小鼠前脂肪細胞增殖與分化的影響展開研究。 為深入闡明ZAG對

3、3T3-L1細胞增殖與分化影響的可能機制，我們進一步選擇脂肪細胞內脂質代謝關鍵酶：脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，FAS)與激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase，HSL)作為研究目標，探討ZAG對FAS和HSL基因表達的影響。 方法： 1.利用陽離子脂質體法向3T3-L1小鼠前脂肪細胞轉染mZAG表達質粒(PcDNA3.1(-)-mZAG)，建立ZAG過表達的體外細胞培養(yǎng)

4、模型。 2.以MTr法觀察不同濃度mZAG表達轉染后不同時間，ZAG對3T3-L1細胞的增殖的影響。 3.采用含胰島素、地塞米松與IBMX的分化培養(yǎng)基誘導分化3T3-L1細胞，于分化不同階段向細胞內轉染不同濃度mZAG表達質粒。轉染后第二天，以油紅O染色與染料提取，以及細胞內甘油三酯測定法測定細胞內脂質含量，從而觀察ZAG對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響。 4.分化不同階段向3T3-L1細胞內轉染不同濃度mZA

5、G表達質粒，轉染后第二天收集細胞標本，提取總RNA并逆轉錄為cDNA，采用實時熒光定量PCR對細胞內FAS與HSLmRNA表達水平進行檢測，以研究ZAG對FAS及HSLmRNA表達水平的影響。 5.分化不同階段向3T3-L1細胞內同時轉染不同濃度mZAG表達質粒與相同濃度分別含FAS與HSL基因啟動子序列的螢光素酶報告基因質粒，轉染后第二天采用雙螢光素酶報告基因監(jiān)測系統(tǒng)測定FAS與HSL基因啟動子活性，以研究ZAG對FAS及HS

6、L基因啟動子活性的影響。 結果： 1.ZAG對3T3-L1細胞的增殖具有刺激作用，該刺激作用具有劑量與時間依賴性，最大刺激作用發(fā)生與最高濃度轉染組轉染后144小時，為對照組的143.4±12.1％(p<0.01)。 2.ZAG抑制3T3-L1細胞的分化，油紅O染色及細胞內甘油三酯測定結果顯示，mZAG過表達組細胞內脂質含量相對于對照組顯著下降。 3.ZAG抑制FAS基因的表達。不同濃度mRNA質粒于分化不

7、同時間轉染細胞后，細胞內FAS mRNA表達水平相對于對照組均顯著下降，FAS啟動子活性也受到顯著抑制。 4.ZAG抑制HSL基因的表達。不同濃度mRNA質粒于分化不同時間轉染細胞后，細胞內HSL mRNA表達水平相對于對照組均顯著下降，HSL啟動子活性也受到顯著抑制。 結論： 本研究成功建立了ZAG過表達體外細胞培養(yǎng)模型，并且以此為基礎，成為第一例探討ZAG對3T3-L1小鼠前脂肪細胞增殖與分化的影響的研究。結