NO對CS2致大鼠下丘腦-垂體-睪丸軸生殖內(nèi)分泌功能影響的干預作用.pdf

1、二硫化碳（Carbon disulfide，CS2）為工業(yè)上常用的一種有機溶劑。近年來，其對男性生殖系統(tǒng)影響的報道越來越多。前期研究結果表明CS2 可導致雄性大鼠下丘腦-垂體-性腺（Hypothalamic-pituitary-gonad axis，HPGA）分泌功能紊亂，同時還影響睪丸組織中一氧化氮（Nitric Oxide，NO）含量及總一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase，NOS）活性、誘導型NOS（iNOS）

2、活性下降。因而推測，CS2 可能通過影響下丘腦、垂體、睪丸中NOS的活性來影響NO的分泌，進而導致HPGA分泌功能紊亂，最終影響雄性生殖健康。本實驗以CS2 為受試物，以下丘腦-垂體-性腺軸為研究對象，擬從整體動物實驗角度，系統(tǒng)分析在NO 供體（硝普鈉，SNP）和NOS 抑制劑（N-甲基-L-精氨酸，L-NMMA）干預時，CS2 作用下下丘腦-垂體-性腺軸分泌功能的改變及其相互關系，為進一步闡明NO 對生殖內(nèi)分泌的作用，預防及治療CS2

3、中毒、開發(fā)研制新的藥物提供理論依據(jù)。
　　 36只SD 雄性大鼠按體重隨機分為6組，每組6只動物，設對照組（0 mg/m3）、低劑量CS2 染毒組（50 mg/m3）、中劑量CS2 染毒組（250 mg/m3）、高劑量CS2 染毒組（1250 mg/m3）、SNP組（5mg/kg）及L-NMMA組（2 mg/kg），其中后兩個干預組的CS2 吸入染毒濃度均為1250 mg/m3；SNP 及L-NMMA 為動物染毒結束前10天腹腔

4、注射；CS2 為靜式吸入染毒，每天2h，每周5天，共染毒10周。染毒結束后，收集大鼠血液標本，分離大鼠下丘腦、垂體、睪丸組織。CS2 對大鼠組織病理形態(tài)學、NOS 活性及NO 含量、性激素水平和精子質(zhì)量等的影響分別采用HE 染色、免疫組織化學法、硝酸還原酶法、放射免疫法及流式細胞術等方法檢測。
　　 研究結果顯示：1、睪丸免疫組化：iNOS、nNOS 主要在睪丸間質(zhì)細胞表達；eNOS在睪丸間質(zhì)細胞、生精細胞（主要是初級精母細胞）

5、、血管內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞中均見有表達。各分型NOS表達量及表達部位在不同CS2 染毒組表達不同。2、NOS 活性及NO 含量：CS2 染毒組大鼠血清、下丘腦、垂體、睪丸組織中總NOS 活性降低，NO含量減少；SNP組使NOS 活性升高，NO 含量增加；注射L-NMMA后變化不明顯。3、性激素水平：CS2 染毒組血清GnRH、LH 含量與對照組相比均有所下降，T 含量隨CS2染毒濃度的增加有先升高后降低的趨勢，F(xiàn)SH 含量隨著染毒濃度的

6、增加而增加，且高劑量組與對照組相比差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；SNP組血清中GnRH、LH 及T含量與高劑量組相比均有所升高，且差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），F(xiàn)SH 含量變化不明顯（P>0.05）。4、CS2 染毒對大鼠精子質(zhì)量的影響及NO的干預作用：CS2 染毒組精子總數(shù)減少，精子活動率降低，畸形精子數(shù)（率）增高，精子運動能力降低。SNP組精子總數(shù)、精子活動率、精子運動能力、A 級精子數(shù)均有所增加。L-NMMA 對精子

7、質(zhì)量的影響不明顯。5、HE 染色：CS2 染毒組下丘腦神經(jīng)元核固縮，部分神經(jīng)元胞漿空泡變、水腫，且伴隨著神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生；垂體嗜酸性粒細胞增多，以高劑量組最明顯，部分細胞出現(xiàn)核固縮、胞質(zhì)空泡化；睪丸生精小管萎縮，生精細胞排列紊亂，細胞數(shù)目及層次減少，甚至空泡變，間質(zhì)未見異常改變。SNP組病理變化較染毒組減輕；L-NMMA組有加重病變的趨勢。
　　 從以上結果可以看出：免疫組化實驗證實了CS2 染毒可影響睪丸組織中各型NOS的表達