氟暴露對人群和雄性大鼠生殖內(nèi)分泌干擾作用研究.pdf

1、長期以來，氟的有害研究重點(diǎn)集中在其對骨骼、牙齒等骨相組織的損傷。自1976年Waldbott指出非骨相組織的概念，人們對氟中毒的研究進(jìn)入了一個新的階段，有關(guān)氟對其它方面的研究不斷報道。大量的研究表明氟對生殖系統(tǒng)存在多方面的影響，但是，研究多集中在對生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的影響，對作用機(jī)制研究不足。 1995年美國學(xué)者提出了環(huán)境內(nèi)分泌干擾化學(xué)物的概念，此后，氟對生殖系統(tǒng)損傷作用的研究成為國內(nèi)外一個熱點(diǎn)。對此，國內(nèi)外不同實(shí)驗(yàn)室分別從不同

2、層次展開研究，但是氟致生殖內(nèi)分泌損傷的研究都偏重于對某個性腺的影響，指標(biāo)層次單一，且分散，對下丘腦一垂體一性腺軸系統(tǒng)全面的觀察尚不多見；氟對人群生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的早期影響的系統(tǒng)研究及相關(guān)生物標(biāo)志物的報道不多。 故本課題分兩部分進(jìn)行研究。第一部分用環(huán)境流行病學(xué)調(diào)查的方法，旨在研究氟對成人下丘腦一垂體一性腺軸各生殖激素的作用。第二部分為動物實(shí)驗(yàn)。選用Wistar大鼠經(jīng)飲水加氟染毒建立生殖內(nèi)分泌損傷模型，系統(tǒng)研究氟對下丘腦一垂體一性腺軸

3、的作用。通過分析精子計數(shù)、活動率、畸形率，測定血清性激素含量，從分子水平觀察氟對與生殖有關(guān)的激素等生物大分子是否有影響，探討氟是否具有生殖內(nèi)分泌干擾作用及其作用機(jī)制，并期望為發(fā)現(xiàn)早期、靈敏的生物標(biāo)志物提供一些線索，最終為氟暴露人群防治地方性氟中毒提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和基礎(chǔ)資料。 第一部分 人群調(diào)查 調(diào)查內(nèi)容和方法： 1 調(diào)查地區(qū)選擇根據(jù)河南省疾病預(yù)防與控制中心以往水質(zhì)調(diào)查及水氟測定結(jié)果，選擇河南省開封縣孫營村為調(diào)查區(qū)，平

4、均水氟濃度為3.9 mg/L；選擇自然狀況、經(jīng)濟(jì)條件、人口構(gòu)成、農(nóng)作物種類、生活習(xí)慣等條件均與高氟區(qū)相似的該縣沈李樓村作為對照區(qū)，水氟濃度小于1.0mg/L，兩地區(qū)均無工業(yè)氟污染。 2 調(diào)查對象的選擇對兩地居住5年以上20-45歲成人進(jìn)行健康體檢，選擇無職業(yè)接觸，無不良嗜好、無消耗性疾病、近期無鈣磷代謝紊亂，無服用鈣制劑的體檢者150人，采集空腹靜脈血，檢測血清性激素。其中高氟區(qū)男性29人，女性38人，對照區(qū)男性37人，女性46

5、人。 3 氟負(fù)荷調(diào)查 3.1 飲用水氟測定入戶采樣。2006年4月，在當(dāng)?shù)刎?fù)責(zé)人的陪同下，到居民家中，用潔凈50mL聚乙烯塑料瓶，潤洗2-3次后，裝滿該戶居民家中飲用水，帶回當(dāng)晚測定水氟含量。測定步驟嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法測定(WS/T 106-1999)。 3.2 尿氟含量測定該地20-45歲居民提前一天每人發(fā)放1個潔凈聚乙烯塑料瓶子，留存晨尿，第二天體檢時收集，滿足條件者待測。尿氟測定步驟嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法(WS/T

6、89-1996)進(jìn)行。 4 人群性激素測定對當(dāng)?shù)?0-45歲居民進(jìn)行健康體檢時滿足條件者采集靜脈血5mL，當(dāng)天離心分離血清，-20℃保存，2周內(nèi)測定。促性腺激素釋放激素、促黃體生成素、血清睪酮、雌二醇等采用試劑盒，用放免法測定。 5 統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)和單因素方差分析，a=0.05。 小結(jié)： 高氟區(qū)男性人群血清LH水平升高，女性無明顯變化；高氟區(qū)男性人群血清T降低

7、，女性升高，提示氟能干擾人群體內(nèi)生殖激素水平，從而表現(xiàn)生殖內(nèi)分泌干擾作用；且高氟區(qū)男性人群血清LH水平明顯升高，提示對于男性的影響大于女性的影響，應(yīng)該引起足夠重視。 第二部分 動物實(shí)驗(yàn) 材料和方法： 1 劑量分組選用3-4周齡清潔級雄性Wistar大鼠36只，體重55g-70g，隨機(jī)分為6組，每組6只，即對照組A、對照組B、低氟組A、低氟組B、高氟組A、高氟組B。對照組給予去離子水，低氟組A、B均為30 mg/t

8、，氟化鈉溶液，高氟組A、B均為100 mg/L氟化鈉溶液。 2 染毒方法及檢測指標(biāo)按上述染毒劑量，對各組大鼠均用飲水加氟，自然飲用。染毒8周后，稱重、麻醉，并處死一批動物，解剖取睪丸、附睪，稱重并計算其臟器系數(shù)，然后進(jìn)行精子質(zhì)量分析；采用放射免疫的方法檢測血清GnRH、FSH、ICSH、PRL，、T、E<,2>水平；用氟離子選擇電極法測定睪丸中氟的含量；染毒16周后，處死第二批動物，重復(fù)上述處理。 3統(tǒng)計學(xué)處理各組間精子畸形率和