微囊藻毒素-LR生殖內分泌干擾作用的體內和體外實驗研究.pdf

1、微囊藻毒素(MCs)是一類在藍藻水華污染中出現頻率最高、產量最大、造成危害最嚴重的藍藻毒素。近來研究發(fā)現，MCs具有生殖毒性，能導致性腺病理損傷，體內性激素水平紊亂，是潛在的環(huán)境內分泌干擾物。本研究以MC-LR為染毒物，以生殖內分泌系統(tǒng)中性激素的合成與調節(jié)為中心，結合體內和體外的實驗，分別從組織結構、激素水平、基因表達各層面的變化探討了MCs對生殖內分泌系統(tǒng)的干擾作用及可能的影響機制。
　　在體內實驗中，采用斑馬魚為實驗材料，模擬

2、野外自然環(huán)境下慢性暴露過程，仔魚從出膜5d開始分組暴露于濃度為0，0.3，3和30μg/L的MC-LR中，直至90d性成熟。選取雄性斑馬魚，分別從生長發(fā)育參數、性腺結構病理變化和性激素分泌水平，以及下丘腦-垂體-性腺軸(HPG)上類固醇調節(jié)相關基因變化幾方面進行分析。結果顯示:從仔魚-性成熟的生命周期的MC-LR慢性暴露會導致生長抑制、精巢組織損傷和精子發(fā)育遲緩。實驗中，30μg/L暴露組中性激素T/E2比例的顯著下降，表明MC-LR的

3、慢性暴露導致了性激素分泌調節(jié)失衡，并且通過調節(jié)HPG軸上性激素合成和作用關鍵基因（gnrh2，gnrh3，fshβ，lhβ，ar和cyp19a1b）的表達，促進血液循環(huán)中睪酮(T)向雌二醇(E2)的轉化。此外，各暴露組雄魚肝臟vtg1基因均顯著上調，提示MC-LR的長期慢性暴露可能產生雌激素樣效應風險。本實驗結果表明，對斑馬魚整個生長發(fā)育周期的慢性MC-LR暴露會對精巢造成結構和功能損傷，并干擾生殖系統(tǒng)正常內分泌調節(jié)，其潛在的內分泌干擾

4、作用可能對MCs污染水域魚類的生長、繁育乃至種群動態(tài)結構產生威脅。
　　體外實驗首次采用人腎上腺皮脂瘤細胞(H295R)為實驗材料，按照篩選類固醇干擾物的常用方法，使用不同濃度梯度MC-LR(0，1，100，500，1000，5000nM)分別進行暴露，48h后收集細胞和培養(yǎng)基，測定培養(yǎng)基中性激素T和E2的含量及細胞中類固醇分泌通路上相關基因的表達。結果顯示:各暴露組性激素合成相關基因(StAR，HMGR，CYP11A，CYP17