遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤致病基因突變的分析.pdf

1、遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤(hereditary multiple osteochondroma)又稱遺傳性多發(fā)性外生骨疣(HME)，是骨骼系統(tǒng)常見的常染色體顯性遺傳病。本病以骨表面有軟骨帽的骨隆突形成為特征，常伴有關節(jié)疼痛、運動受限、長骨形態(tài)異常、瘤體壓迫鄰近血管神經(jīng)等并發(fā)癥，并有一定幾率惡變成軟骨肉瘤(惡變率約0.5％-5％)。有研究表明HME具有遺傳異質性，其發(fā)病機制與EXT基因突變有關。EXT基因家族主要由EXT1、EXT2、EXT3

2、和具有具有相同羧基端編碼產(chǎn)物的EXTL1、EXTL2及EXTL3所組成。EXT突變引起Ihh、Wnt、BMP等信號傳導通路異常，影響軟骨細胞增殖分化，從而導致骨軟骨瘤的形成。大量研究報道提示多數(shù)HME患者的致病基因與EXT1和EXT2有關，而與EXTL有關的基因突變尚未有在任何HME患者中發(fā)現(xiàn)。因此，除上述的EXT1和EXT2的基因突變外，是否在EXT基因存在的新的突變，仍待進一步研究。
　　目的:通過PCR檢測技術，對1個遺傳性

3、多發(fā)性骨軟骨瘤家系進行EXT1及EXT2的基因突變篩查，初步掌握PCR及測序等致病基因突變篩查的方法，以分析遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤發(fā)病機制中相關基因突變情況，并為進一步分析突變基因所產(chǎn)生的功能變化提供依據(jù)。
　　方法:收集來自湖南婁底的一例遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤家系。該家系共4代，21人，患者7人。其中收集血液標本3個，提取DNA并樣本濃度標準化后，使用primer3在線軟件設計引物，共設計20對引物，根據(jù)引物的設計參數(shù)，應用PCR擴

4、增EXT1及EXT2基因的熱點編碼區(qū)及外顯子側翼序列，再使用聚丙烯酰胺凝膠電泳對產(chǎn)物進行驗證，最終對PCR產(chǎn)物進行直接測序。通過DNA star軟件分析測序結果，將發(fā)現(xiàn)的變異在db SNP數(shù)據(jù)庫進行比對分析以排除SNP位點。
　　結果:選擇對家系內(nèi)的患者(Ⅱ:3，Ⅲ:3，Ⅳ:2)針對遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤致病基因EXT1和EXT2進行突變篩查。通過PCR及測序，EXT1熱點區(qū)域未發(fā)現(xiàn)任何變異;EXT2熱點區(qū)域中發(fā)現(xiàn)3個SNP位點(r