Notch1-Hes信號(hào)通路在強(qiáng)直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶中的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景:
　　 強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)發(fā)病率在炎癥性關(guān)節(jié)炎中占第二位，其發(fā)病機(jī)制仍不清楚。由于其好發(fā)于中青年男性，具有較高的致殘、致畸率，目前已成為國(guó)內(nèi)外人口與健康研究領(lǐng)域的重點(diǎn)。AS的標(biāo)志性病理特征與其它類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎類疾病不同，后者主要表現(xiàn)為軟骨與骨的侵蝕性破壞。而AS則主要表現(xiàn)為病理性新骨形成的骨化過(guò)程，表現(xiàn)為在新生骨小梁里伴隨著新的軟骨生成和微血管的持續(xù)性形成，纖維組織也在生成

2、，從而導(dǎo)致異常骨化，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)強(qiáng)直，這是AS致殘的主要原因。另外，研究表明AS的骨化作用和炎癥反應(yīng)，是有著不同的發(fā)病機(jī)理，是相對(duì)獨(dú)立的的兩個(gè)過(guò)程。即使成功地阻斷這類患者的炎癥過(guò)程，也不能停止關(guān)節(jié)強(qiáng)直的進(jìn)程。Notch1基因既可以維持干細(xì)胞處于未分化狀態(tài)，也可以調(diào)節(jié)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化。一旦定向分化為成骨細(xì)胞，Notch1信號(hào)又可促進(jìn)成骨細(xì)胞增生，并抑制成骨細(xì)胞成熟。因此，探討Notch1-Hes信號(hào)通路在AS骨化發(fā)生過(guò)程中的作用，具

3、有重要的基礎(chǔ)研究?jī)r(jià)值和潛在的臨床意義。
　　 研究目的:
　　 利用先進(jìn)的Affymetrix全系統(tǒng)芯片技術(shù)，對(duì)AS患者髖關(guān)節(jié)韌帶與正常髖關(guān)節(jié)韌帶進(jìn)行篩選，獲得基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù)。結(jié)合國(guó)內(nèi)外檢索文獻(xiàn)，選擇最為可能的骨化基因，進(jìn)行從基因、蛋白到組織樣本切片的驗(yàn)證。同時(shí)與臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性研究分析，探討其與AS韌帶骨化病程的關(guān)系。
　　 研究方法:
　　 以2010-2012年在長(zhǎng)海醫(yī)院骨科就診行人工髖關(guān)節(jié)置

4、換術(shù)的3例AS患者作為病例組研究對(duì)象，所有患者均符合84年強(qiáng)直性脊柱炎紐約修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)，另外選取3例股骨頸骨折在長(zhǎng)海醫(yī)院骨科行人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)患者（排除其他各種骨關(guān)節(jié)疾?。┳鳛檎?duì)照組。利用Affymetrix全系統(tǒng)芯片技術(shù)進(jìn)行差異基因的篩選。根據(jù)篩選結(jié)果，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，選取候選骨化基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證、Western Blot技術(shù)驗(yàn)證相關(guān)蛋白，免疫組化技術(shù)驗(yàn)證蛋白表達(dá)情況。擴(kuò)大樣本（22例AS患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)同上），運(yùn)

5、用免疫組化技術(shù)檢測(cè)髖關(guān)節(jié)樣本中候選基因的表達(dá)情況，并與AS患者的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.按照差異倍數(shù)1.5倍分析，AS組與與正常對(duì)照組的基因芯片結(jié)果顯示，下調(diào)基因652個(gè)，上調(diào)基因966個(gè)。差異變化的功能基因涉及多種信號(hào)通路，其中Notch1基因上調(diào)1.53倍;Hes基因上調(diào)1.75倍。
　　 2.在擴(kuò)大的樣本中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示，Notch1基因、Hes基因在病例組的表達(dá)較正

6、常對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。Western Bolt結(jié)果顯示Notch1蛋白在AS患者組表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組。
　　 3.在免疫組化切片中，Notch1蛋白與Hes蛋白主要表達(dá)于韌帶組織的周緣與中央靠血管處。AS組兩個(gè)蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。其中Hes蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與AS患者的病程呈正相關(guān)(r=0.594，P＜0.01)。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.AS患者髖關(guān)節(jié)韌帶組織與正