miR-210敲低聯(lián)合放療對裸鼠移植人肝癌的抑癌效應(yīng).pdf

1、目的:本實驗通過建立穩(wěn)轉(zhuǎn)miR-210反義和隨機(jī)寡核苷酸的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株，將其接種于裸鼠皮下，在常氧和乏氧條件下接受放射治療，研究敲低miR-210聯(lián)合常氧和乏氧放療對裸鼠體內(nèi)移植人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑瘤效應(yīng)并探討其機(jī)制。
　　 方法:建立穩(wěn)轉(zhuǎn)miR-210反義和隨機(jī)寡核苷酸的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株。實時定量反轉(zhuǎn)錄PCR(Real-time Reverse transcription-Polym

2、erase Chain Reaction，RT-PCR)檢測乏氧SMMC-7721細(xì)胞miR-210表達(dá)。將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染miR-210反義序列和隨機(jī)序列的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞接種于裸鼠皮下。待各組裸鼠腫瘤直徑達(dá)到6-8mm，檢測各組裸鼠乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factors，HIF-1α)和miR-210靶基因蛋白表達(dá);24h后各組裸鼠腫瘤局部在常氧或乏氧條件下接受8 Gy照射，測量各組裸鼠放療后不同

3、時間的腫瘤體積，記算各組裸鼠的腫瘤生長延緩時間(TGD)，輻射增敏系數(shù)和平均存活時間;照后24 h用免疫組化染色檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性和腫瘤間質(zhì)微血管密度，用TUNEL法檢測肝癌細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果:(1) SMMC-7721細(xì)胞和轉(zhuǎn)染隨機(jī)序列細(xì)胞乏氧培養(yǎng)后miR-210表達(dá)隨時間逐漸增加，48 h達(dá)峰值，兩組細(xì)胞miR-210表達(dá)在各個時間點均無明顯差異，miR-210敲低細(xì)胞miR-210表達(dá)在各個時間點均低于SMMC-77

4、21細(xì)胞。(2)腫瘤直徑達(dá)到6～8 mm，SMMC-7721組和轉(zhuǎn)染隨機(jī)序列細(xì)胞組需14 d，miR-210敲低組需21 d。(3)照后第30天，隨機(jī)序列乏氧照射組、miR-210敲低組、miR-210敲低乏氧照射組、常氧照射的隨機(jī)序列組和miR-210敲低組腫瘤體積抑制率分別為19.93％、28.92％、37.24％、52.07％和71.51％;平均生存時間分別為51.17±6.85d、53.83±6.85 d、60.50±5.36

5、d、72.50±5.58 d和84.33±5.54 d;腫瘤生長延緩時間分別為2.8 d、3.3 d、4.8 d、6.4 d和11.9 d。miR-210敲低常氧照射和乏氧照射組的輻射增敏系數(shù)分別為1.86和1.71。(4)miR-210敲低組HIF-1α表達(dá)明顯低于對照組;miR-210靶基因蛋白表達(dá)明顯高于對照組;照射后24 h，miR-210敲低常氧或乏氧照射組的腫瘤細(xì)胞增殖活性和腫瘤間質(zhì)微血管密度分別明顯低于隨機(jī)序列常氧或乏氧照