食管腫瘤干細胞分離及生物學性狀的初步研究.pdf

1、目的：應用磁珠分選法(MACS)分離人食管腫瘤細胞(ECCs)中p75NTR陽性細胞，并研究其生物學特性。方法：從人原發(fā)食管癌組織中培養(yǎng)出可連續(xù)傳代的腫瘤細胞系；應用 FACS檢測ECCs中p75NTR陽性細胞，并應用MACS分離ECCs中p75NTR陽性細胞；觀察p75NTR陽性細胞生長特點、軟瓊脂克隆形成能力、在無血清培養(yǎng)基(SFM)中形成細胞球的能力，及其在裸鼠體內(nèi)成瘤能力；檢測在SFM中ECCs所形成細胞球中p75NTR陽性細胞

2、的比例及生長特點；檢測ECCs在化療藥物作用不同時間檢測其中p75NTR陽性細胞比例的變化，及p75NTR陽性細胞與陰性細胞在不同濃度化療藥物作用48小時后存活比例的比較。結果：應用Ⅱ型膠原酶消化法從人原發(fā)食管腫瘤組織中培養(yǎng)出6個可連續(xù)傳代的EC細胞系；應用FCM檢測ECCs中p75NTR陽性細胞為0～3.35％，MACS分選出ECCs中p75NTR陽性細胞，同收率為20％，純度為90％以上；p75NTR陽性細胞在軟瓊脂中具有較強的克隆

3、形成能力，并能在SFM中懸浮生長、形成細胞球，具有較強的致瘤能力，只需2×10<'3>個細胞即可在裸鼠體內(nèi)形成新的腫瘤；ECCs在SFM中可懸浮生長并形成細胞球，在所形成的細胞球中p75NTR陽性細胞的比例升高；ECCs在經(jīng)化療藥物作用后p75NTR陽性細胞的比例明顯增高(P<0.01)，在不同濃度化療藥物作用48h后p75NTR陽性細胞存活比例較陰性細胞相比明顯增高(P<0.05)。結論：應用 MACS 從ECCs中分離出的p75NT