轉(zhuǎn)化生長因子-β對肌腱愈合和粘連影響的實驗研究.pdf

1、第一部分:肌腱愈合過程中轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因表達的變化 目的:了解兔屈趾肌腱Ⅱ區(qū)傷口愈合過程中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1)基因表達的變化。 方法:60只成年新西蘭大白兔左前中趾Ⅱ區(qū)屈趾深肌腱被完全切斷并修復，分別于1、7、14、21、28、56天獲取肌腱，用原位雜交和免疫組化技術(shù)分析TGF-β1的表達情況。 結(jié)論:正常無損傷的肌腱和腱鞘細胞能產(chǎn)生TGF

2、-β1，當肌腱損傷后，細胞因子被激活，增加的細胞因子主要由肌腱細胞與腱鞘細胞產(chǎn)生，此結(jié)果與肌腱的內(nèi)、外源性愈合機制是一致的。 第二部分:肌腱愈合過程中轉(zhuǎn)化生長因子-β1受體表達的變化 目的:了解兔屈趾肌腱Ⅱ區(qū)傷口愈合過程中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactorβ1Receptors，TGF-βR1)在不同時間和部位的表達情況。 方法:42只成年新西蘭大白兔左前中趾Ⅱ區(qū)屈趾深肌腱被完全

3、切斷并修復，分別于1、7、14、21、28、56天獲取肌腱(每個時間點6只)，對照組取沒有損傷和修復的屈趾肌腱(6只)，用Westernblot和免疫組化技術(shù)分析TGF-βR1的表達情況。 結(jié)論:肌腱損傷修復后，肌腱和腱鞘TGF-βR1的表達明顯增加，在術(shù)后14天達到高峰，56天開始降低，這種受體上調(diào)可能為屈指肌腱術(shù)后疤痕形成的生物學調(diào)節(jié)提供新的途徑。 第三部分:轉(zhuǎn)化生長因子-β1對肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞增殖和膠原

4、產(chǎn)生的影響 目的:探討兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞增殖、膠原產(chǎn)生和TGF-β1對細胞的增殖和膠原產(chǎn)生的影響。 方法:從兔屈趾肌腱分離腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞并培養(yǎng)，測量使用TGF-β1培養(yǎng)后，細胞的數(shù)量和膠原產(chǎn)生量，并與不使用TGF-β1培養(yǎng)的對照組比較。另外，通過RT-PCR反應(yīng)測定使用TGF-β1前后各種細胞Ⅰ型膠原基因的表達。 結(jié)論:調(diào)節(jié)TGF-β1的水平能調(diào)節(jié)膠原的產(chǎn)生，可能為臨床上防止肌腱粘連提供

5、新的途徑。 第四部分:乳酸對肌腱細胞轉(zhuǎn)化生長因子-β表達的調(diào)節(jié)作用 目的:探討乳酸對兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞TGF-β及其受體產(chǎn)生的影響。 方法:從兔屈趾肌腱分離腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞并分別進行培養(yǎng)，在使用25mmol/L的乳酸培養(yǎng)后，酶聯(lián)免疫吸附試驗定量檢測TGF-β及其受體的表達，同時應(yīng)用原位雜交技術(shù)測量TGF-β1mRNA的表達。 結(jié)論:乳酸能顯著增加肌腱細胞的TGF-β、TGF-β受體

6、和TGF-β1mRNA的表達，因此為肌腱愈合過程中調(diào)節(jié)TGF-β水平提供新的途徑。 第五部分:乳酸對肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞增殖和生物學活性的影響 目的:探討兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞增殖、膠原產(chǎn)生和乳酸對細胞的增殖、膠原產(chǎn)生和對TGF-β1、b-FGF、IL-8分泌的影響。 方法:從兔屈趾肌腱分離腱鞘、腱外膜和腱內(nèi)膜細胞并培養(yǎng)，測量使用乳酸培養(yǎng)后，細胞的數(shù)量，膠原產(chǎn)生量和TGF-β1、b-FGF、I